5-FAM-NH?,全稱為5-氨基熒光素(5-Isomer of Fluorescein Amine),是一種結構功能活性高的熒光素類染料分子。它是熒光素(Fluorescein)分子在5位引入一個伯胺(—NH?)基團而形成的衍生物。
英文名 N-(6-aminohexyl)-3',6'-dihydroxy-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-5-carboxamide
CAS號 138589-19-2
分子量 474.5
分子式 C27H26N2O6
熔點 N/A
化學特性與功能位點
伯胺基團(—NH?)
該基團在堿性條件下容易與羧基類分子反應,形成穩(wěn)定的酰胺鍵。它也是核酸或蛋白質(zhì)共價標記反應中重要的連接位點。
水溶性與極性結構
熒光素結構整體偏親水,利于在水相中操作,與生物分子具有良好的兼容性,不容易沉淀。
官能團改造潛力
可進一步改造為FAM NHS、FAM maleimide、FAM azide等活性形式,拓展其應用范圍至多種偶聯(lián)體系。
四、應用領域
1. 寡核苷酸(DNA/RNA)標記
5-FAM-NH?是寡核苷酸5'端或3'端標記的理想熒光染料,可通過與磷酸化核苷酸形成酰胺鍵,賦予寡核苷酸熒光功能,用于實時定量PCR(qPCR)、探針雜交、電泳成像等。
2. 蛋白質(zhì)和抗體修飾
可通過交聯(lián)劑(如EDC/NHS)將FAM-NH?與抗體、酶或其他蛋白質(zhì)的羧基反應,制備熒光標記蛋白,用于免疫熒光、ELISA、流式細胞術等。
3. 熒光探針設計
FAM作為熒光團,常被用于構建FRET探針、分子開關、金屬離子檢測探針等,利用其光譜變化響應目標分子的結合或環(huán)境變化。
4. 納米顆粒和材料表面修飾
FAM-NH?可用于功能性材料如硅膠、聚合物微球、納米粒表面標記,實現(xiàn)熒光成像、靶向遞送及可視化檢測功能。
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