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配方：尿激酶在6%交聯(lián)瓊脂糖微球上，以50%的純甘油漿液提供。

配體密度：0.11 mg/ml樹脂。

應(yīng)用：**、方便地切割纖溶酶原和其他含有尿激酶特異性裂解位點的重組融合蛋白。

方案：為了找到一個目標蛋白的**切割條件，建議在小范圍內(nèi)進行初步的切割反應(yīng)。尿激酶的成功切割依賴于靶蛋白的正確折疊，使酶能夠進入尿激酶識別序列。一旦達到目標酶切的**條件，就可以得到整個蛋白質(zhì)裂解的**條件。在建立裂解反應(yīng)之前，目標蛋白應(yīng)純化至均勻，并在50 mM Tris緩沖液、0.1 M NaCl、pH 7.4下透析。

1） 輕輕地旋轉(zhuǎn)著珠子。不要渦流。

2） 將250µl懸浮漿液等分，并將其添加到1 mg Eppendorf管中的目標蛋白質(zhì)中。我們建議蛋白質(zhì)體積大于400μl/管，以便于反應(yīng)過程中的適當混合。

3） 通過倒置試管（不要渦流）輕輕混合，并在37°C的旋轉(zhuǎn)搖床上搖動。

4） 以固定的時間間隔，旋轉(zhuǎn)試管，將試樣等分并立即冷凍。反應(yīng)結(jié)束后，用SDS-PAGE分析樣品。

裂解目標蛋白的回收：

1） 融合蛋白完全裂解后，將反應(yīng)混合物在1500 x g下旋轉(zhuǎn)2-3分鐘。

2） 去除上清液，并用0.2 ml 50 mM Tris緩沖液、0.1 M NaCl、pH 7.4清洗珠子。

3） 重復(fù)步驟1和2以**限度地回收目標蛋白及其裂解片段。進一步的層析可能需要從目標蛋白中去除裂解片段。

儲存條件-20°C

裝運條件凝膠包

僅供研究使用！不用于人類。