青花C. paliurus GT1在嫩葉、愈傷組織和枝條中表達(dá)量較高,在老葉和樹皮中表達(dá)量較低,在根中無表達(dá)。
重組C. paliurus GT1蛋白在大腸桿菌中異型表達(dá),并表現(xiàn)出對(duì)多種黃酮類化合物的催化活性,有利于底物和區(qū)域特異性生物合成。進(jìn)一步的酶分析表明,C. paliurus GT1偏愛某些羥基糖基化。
C. paliurus GT1對(duì)黃酮類化合物和黃酮醇的糖基化反應(yīng)具有較強(qiáng)的催化活性,但對(duì)異黃酮類化合物、黃酮類化合物和三萜類化合物的糖基化反應(yīng)較弱。
C. paliurus GT1也能夠催化糖與芳香化合物上的硫醇(S-)或胺(N-)位點(diǎn)的結(jié)合,但不能催化脂肪族化合物上的結(jié)合。
分子對(duì)接和定點(diǎn)誘變分析表明,A43F、V84P和M201Y**改變了該區(qū)域的選擇性和活性,而W283M的V309-D320區(qū)域的突變和缺失增強(qiáng)了該區(qū)域的活性和二糖的形成。
在此,我們對(duì)青花菜中**多功能糖基轉(zhuǎn)移酶進(jìn)行了鑒定和鑒定,為進(jìn)一步了解黃酮類苷類化合物的生物合成提供了基礎(chǔ)。C. paliurus GT1可作為合成生物學(xué)工具用于O-、N-或s -糖基化天然/非天然產(chǎn)物的合成。
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