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          UDP糖|用液相色譜法測(cè)定長(zhǎng)花百合花粉中部分純化糖激酶(glucuronkinase)的非放射性酶
          發(fā)布時(shí)間:2022-02-18     作者:UDP糖   分享到:

          重組的udp -糖焦磷酸化酶,該酶具有廣泛底物特異性,來自豌豆(Pisum satium, PsUSP)或擬南芥(Arabidopsis thaliana, AtUSP)作為偶聯(lián)酶。葡萄糖醛酸激酶經(jīng)deae -瓊脂糖柱部分純化。


          通過非放射性偶聯(lián)酶試驗(yàn)測(cè)定激酶活性,在該反應(yīng)中產(chǎn)生的葡萄糖醛酸-1-磷酸被udp -糖焦磷酸化酶使用,并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為udp -葡萄糖醛酸。


          該udp -糖,以及不同的副產(chǎn)物,用**液相色譜法檢測(cè),采用強(qiáng)陰離子交換柱或反相C18柱,波長(zhǎng)為260 nm。由于USP具有廣泛的底物特異性,該方法適用于不同的激酶和糖。


          **液相色譜法是高度敏感的,允許在pmol min-1范圍內(nèi)測(cè)量激酶活性。


          此外,它可以用于純激酶以及粗或部分純化的酶溶液的測(cè)定,而沒有任何atp酶或NADH氧化酶的干擾背景,這在不同的光度測(cè)定中會(huì)引起麻煩。

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