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          UDP 糖|通過殘基取代拓寬黑莓糖基轉(zhuǎn)移酶UGT78H2的糖供體選擇性
          發(fā)布時(shí)間:2022-01-13     作者:UDP 糖   分享到:

          糖基化次生代謝物在被消耗的植物和相關(guān)產(chǎn)品中占很大比例的營(yíng)養(yǎng)或成分。

          糖基修飾在很大程度上取決于植物udp -糖基轉(zhuǎn)移酶(UGTs)的活性。這些反應(yīng)的底物選擇性和特異性的機(jī)制仍不清楚。

          黑莓果實(shí)中UGT基因UGT78H2的克隆及功能鑒定。體外酶底物特異性分析和酶動(dòng)力學(xué)證明UGT78H2糖基酸只使用槲皮素尿苷-5 '二磷酸葡萄糖醛酸(UDP-glucuronic acid,葡萄糖醛酸)和尿苷-5 '二磷酸半乳糖UDP 糖。

          位點(diǎn)定向突變引入了兩個(gè)殘基(N340P, K360N),這兩個(gè)殘基以前沒有研究過。

          該突變提高了蛋白質(zhì)的催化效率,尤其是對(duì)UDP 糖的催化效率(提高了23%),并擴(kuò)大了糖供體的選擇性,也可以利用udp -葡萄糖。

          分子模擬和生化分析結(jié)果表明,PSPG (plant secondary product glycosyltransferase,植物次生產(chǎn)物糖基轉(zhuǎn)移酶)基序的第23個(gè)殘基(UGT78H2中的360個(gè))是確定該糖選擇光譜的關(guān)鍵殘基。

          獲得了UGT78H2的啟動(dòng)子。利用UGT78H2pro::GUS報(bào)告基因系統(tǒng)進(jìn)行的轉(zhuǎn)基因分析表明,啟動(dòng)子控制的轉(zhuǎn)錄本主要在年輕組織中表達(dá)。

          亞細(xì)胞定位研究表明,UGT78H2在細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中是一種可溶性蛋白。這些結(jié)果闡明了UGT78H2的生物學(xué)功能,為園藝植物基質(zhì)選擇性修飾特別是糖供體選擇性修飾提供了**途徑。

          UDP-L-RhaNAcUDP-4n-D-FucNAc
          UDP-D-XylNAcUDP-VioNAc
          UDP-2-Biotinyl-GalNAcUDP-6-Biotinyl-GalNAc


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