糖基轉(zhuǎn)移酶(GT)介導(dǎo)法被認(rèn)為是大規(guī)模生產(chǎn)糖苷**的方法之一。
然而,GT酶需要一個(gè)糖核苷酸作為供體底物,必須通過回收核苷酸部分在原位生成用于制備應(yīng)用,例如通過蔗糖合酶(SUS)。
將3個(gè)植物GT基因CaUGT2、VvGT14a和VvGT15c與真菌SbUGTA1在大腸桿菌BL21和W細(xì)胞中成功共表達(dá)。
在體外實(shí)驗(yàn)中,由4個(gè)GT基因和GmSUS共表達(dá)細(xì)胞制備的粗蛋白提取物,在提供蔗糖和UDP的條件下,能夠?qū)讉(gè)小分子轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的糖苷。
此外,GmSUS能夠提高糖基化效率,降低UDP-glucose供給量。
在生物轉(zhuǎn)化體系中,VvGT15c與GmSUS共表達(dá)也能改善香葉醇的糖基化作用,增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)有毒萜烯醇的抗性。
GT-EcW和GTSUS-EcW細(xì)胞可耐受2 mM香葉醇,在超過40 μg ml?1 h?1的生產(chǎn)速率下,將超過99%的底物轉(zhuǎn)化為葡萄糖苷。
結(jié)果證實(shí),SUS的共表達(dá)允許UDP-糖的原位再生,并避免了UDP對(duì)產(chǎn)物的**。
UDP-L-RhaNAc | UDP-4n-D-FucNAc |
UDP-D-XylNAc | UDP-VioNAc |
UDP-2-Biotinyl-GalNAc | UDP-6-Biotinyl-GalNAc |
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