通過(guò)平衡透析檢測(cè)尿苷二磷酸葡萄糖脫氫酶與NADH的結(jié)合。udp 糖的存在對(duì)NADH的結(jié)合是必要的。
其他類(lèi)似物如UDPxylose, udp 糖和UDPglucuronic acid不能取代UDPglucose作為NADH結(jié)合的效應(yīng)物。
udp木糖與UDPglucose爭(zhēng)奪udp 糖結(jié)合位點(diǎn),從而釋放結(jié)合的NADH。在UDPglucose存在的情況下,NADH與UDPglucose脫氫酶的結(jié)合達(dá)到飽和**,每個(gè)酶六聚體結(jié)合3 mol NADH,并表現(xiàn)出正協(xié)同作用,Hill數(shù)= 1.34。
此外,還研究了udp -糖對(duì)催化位點(diǎn)衍生的udp葡萄糖脫氫酶熒光的影響。
已經(jīng)檢測(cè)到兩類(lèi)udpxy糖結(jié)合位點(diǎn)。其中一類(lèi)具有較高的親和力(Kdiss = 3 μM,由平衡透析測(cè)定),但不影響熒光團(tuán)的熒光,而另一類(lèi)具有較低的親和力(Kdiss = 120 μM),并導(dǎo)致紅移熒光猝滅,可能是通過(guò)影響熒光團(tuán)對(duì)溶劑的暴露來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
高親和位點(diǎn)被確定為未活化催化位點(diǎn)的udp -糖基位,而低親和位點(diǎn)被確定為熒光標(biāo)記催化位點(diǎn)的udp -糖基位。
UDP-L-RhaNAc | UDP-4n-D-FucNAc |
UDP-D-XylNAc | UDP-VioNAc |
UDP-2-Biotinyl-GalNAc | UDP-6-Biotinyl-GalNAc |
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