介紹四種量子點(diǎn)標(biāo)記抗體方法

具體為一種量子點(diǎn)標(biāo)記免疫球蛋白的方法，包括清洗量子點(diǎn)、活化、二次清洗量子點(diǎn)、清洗免疫球蛋白、偶聯(lián)和分離步驟。利用水溶性量子點(diǎn)的結(jié)構(gòu)特征和EDC活化羧基的反應(yīng)特點(diǎn)，以及縮合反應(yīng)的反應(yīng)特點(diǎn)，通過(guò)優(yōu)化各個(gè)步驟的條件，使量子點(diǎn)表面的羧基得到充分的活化并處于合適的標(biāo)記環(huán)境中；通過(guò)優(yōu)化偶聯(lián)步驟的條件，使量子點(diǎn)通過(guò)縮合反應(yīng)均能結(jié)合到免疫球蛋白的表面，

量子點(diǎn)的標(biāo)記方法量子點(diǎn)可以與特定抗體或小分子結(jié)合，在不改變其化學(xué)特性的情況下，受到光源激發(fā)后可發(fā)出特定波長(zhǎng)的熒光，通常有以下幾種方法：靜電吸引法、常規(guī)交聯(lián)劑連接法及生物素-親和素法等 。

（一）靜電吸引法正電荷氫核遇到另一個(gè)電負(fù)性強(qiáng)的原子時(shí)，產(chǎn)生靜電吸引。巰基乙酸修飾的量子點(diǎn)表面帶負(fù)電，與帶正電的蛋白質(zhì)表面區(qū)域可通過(guò)靜電吸引連接起來(lái)，而不需要其他試劑。對(duì)于帶中性電荷的蛋白質(zhì)，可以通過(guò)改造蛋白質(zhì)在其末端構(gòu)建帶正電荷的結(jié)構(gòu)，使其能靜電吸附于量子點(diǎn)表面。另外，通過(guò)對(duì)量子點(diǎn)表面修飾使其帶負(fù)電荷后，除了上述的直接靜電吸引靶標(biāo)物質(zhì)外，還可以靜電吸附連接上親和素，然后依靠生物素-親和素的高特異性結(jié)合，間接將量子點(diǎn)連接到蛋白質(zhì)分子上。

（二）常規(guī)交聯(lián)劑連接法交聯(lián)劑是一類小分子化合物，相對(duì)分子質(zhì)量一般在200～600u，具有兩個(gè)或者更多的針對(duì)特殊基團(tuán)（如氨基、巰基等）的反應(yīng)性末端，可以和兩個(gè)或者更多的分子偶聯(lián)從而使這些分子結(jié)合在一起。

（三）生物素-親和素法

生物素-親和素系統(tǒng)（biotin-avidinsystem，BAS）是由于它具有生物素與親和素之間的高度親和力及多級(jí)放大效應(yīng)，并與熒光素、酶、同位素等免疫標(biāo)記技術(shù)有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，使各種示蹤免疫分析的特異性和靈敏度進(jìn)一步提高。

（四）其他標(biāo)記方法

（五）利用異源雙功能交聯(lián)劑琥珀酰亞胺-4-（N-馬來(lái)酰亞胺甲基）-環(huán)己烷-1-羧酸鹽把量子點(diǎn)與抗體或配體的巰基通過(guò)縮合反應(yīng)偶聯(lián)到一起，用于毛細(xì)血管電泳法測(cè)定人IgM，效果良好。量子點(diǎn)標(biāo)記后，通常要分析鑒定標(biāo)記物的質(zhì)量，通常采用的方法有光譜分析和瓊脂糖電泳法。

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