CY3-Collage-Vtype,CY3標(biāo)記膠原蛋白V型的反應(yīng)機(jī)理
CY3標(biāo)記的膠原蛋白V型(Cy3-Collagen V type)是通過將熒光染料CY3共價(jià)結(jié)合于膠原蛋白V型分子上的熒光探針。膠原蛋白V型作為膠原家族成員之一,參與細(xì)胞外基質(zhì)的結(jié)構(gòu)組成,具有特定的三級(jí)和四級(jí)結(jié)構(gòu)。其分子中含有多個(gè)賴氨酸側(cè)鏈氨基,成為熒光染料CY3活性NHS酯偶聯(lián)的關(guān)鍵反應(yīng)位點(diǎn)。
該標(biāo)記過程的核心反應(yīng)機(jī)理為NHS酯與蛋白質(zhì)伯胺基團(tuán)之間的酰胺化反應(yīng)。CY3-NHS酯在適宜的堿性緩沖體系(一般pH 8.0–8.5)中,NHS酯的酯基被膠原蛋白V型賴氨酸的氨基以親核方式攻擊,形成中間四面體復(fù)合物,隨后N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)離去,生成穩(wěn)定的酰胺鍵,實(shí)現(xiàn)染料與蛋白的共價(jià)結(jié)合。
該反應(yīng)具有較高的選擇性和反應(yīng)速率,但對(duì)pH和反應(yīng)時(shí)間較為敏感。過低pH會(huì)使伯胺基質(zhì)子化,降低親核性,影響偶聯(lián)效率;過高pH則可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性或染料水解。溫和的反應(yīng)條件和合適的緩沖體系能夠確保膠原蛋白V型的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定及功能保持。
另外,膠原蛋白V型本身具有高度的三級(jí)結(jié)構(gòu)和纖維狀四級(jí)結(jié)構(gòu),偶聯(lián)過程需避免對(duì)其構(gòu)象產(chǎn)生破壞,確保標(biāo)記后的蛋白仍具備生物學(xué)活性及功能。染料分子的芳香族結(jié)構(gòu)賦予其優(yōu)異的光學(xué)性能,包括高量子效率和光穩(wěn)定性。
完成標(biāo)記反應(yīng)后,通常采用透析或凝膠過濾方法去除游離染料,保證產(chǎn)物的純凈度。標(biāo)記產(chǎn)物在熒光成像、蛋白質(zhì)相互作用及組織工程等領(lǐng)域均具有的應(yīng)用潛力。
綜上所述,CY3標(biāo)記的膠原蛋白V型通過高效且溫和的NHS酯-伯胺親核酰胺化反應(yīng)實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定偶聯(lián),結(jié)合了膠原蛋白的結(jié)構(gòu)特性與CY3染料的光學(xué)優(yōu)勢(shì),適用于多種生物學(xué)和材料科學(xué)研究。
產(chǎn)品名稱:CY3-Collage-Vtype,CY3標(biāo)記膠原蛋白V型
純度:95%+
性狀:固體或液體
儲(chǔ)藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規(guī)格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
廠家:pg電子官方生物
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