CY3-Fibrinogen,CY3標(biāo)記纖維蛋白原的合成步驟
CY3-Fibrinogen 是通過將熒光染料 Cyanine 3(CY3)共價連接到纖維蛋白原分子上,形成的標(biāo)記蛋白復(fù)合物。纖維蛋白原為血漿中的高分子蛋白,分子量約340 kDa,包含多個賴氨酸殘基和N末端自由氨基,是進行熒光標(biāo)記的理想底物。
合成步驟如下:
緩沖液準(zhǔn)備
通常使用pH 8.3的碳酸鹽緩沖液(0.1 M NaHCO?),保持纖維蛋白原溶液穩(wěn)定且氨基官能團處于活性狀態(tài),促進與CY3-NHS酯的反應(yīng)。
蛋白質(zhì)溶解
取高純度纖維蛋白原粉末溶解于緩沖液中,濃度一般在1-5 mg/mL,輕柔攪拌避免蛋白聚集。
CY3-NHS活化酯制備
CY3通常以NHS酯形式購買,溶解于無水DMSO中,配制成濃縮儲備液,保持活性。
標(biāo)記反應(yīng)
在避光條件下,緩慢將CY3-NHS溶液加入纖維蛋白原溶液中,摩爾比通常為1:10至1:20(CY3:纖維蛋白原賴氨酸殘基)。反應(yīng)在室溫下進行1-2小時,輕柔混合以保證均勻反應(yīng)。
終止反應(yīng)與純化
反應(yīng)結(jié)束后通過透析(使用PBS緩沖液,反復(fù)更換),去除游離染料及小分子雜質(zhì)。亦可使用凝膠過濾色譜進一步純化。
濃縮與保存
純化后的CY3-Fibrinogen通過濾膜濃縮至所需濃度,儲存在避光、4°C條件下,避免反復(fù)凍融。
該標(biāo)記蛋白保持纖維蛋白原的結(jié)構(gòu)完整及功能活性,兼具熒光性能,適用于細胞黏附、血液凝固機制研究及熒光成像。
產(chǎn)品名稱:CY3-Fibrinogen,CY3標(biāo)記纖維蛋白原
純度:95%+
性狀:固體或液體
儲藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規(guī)格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
廠家:pg電子官方生物
關(guān)于我們
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