齊墩果酸（Oleanolic Acid, OA）的熒光標記技術(shù)

1. 熒光標記原理與策略

齊墩果酸分子含有羧基、烯烴結(jié)構(gòu)，可通過“羧基–氨基”或“羧基–羥基”形成酯、酰胺鍵與熒光染料偶聯(lián)。常用染料包括FITC（異硫氰酸熒光素）、Cy5、Cy5.5、Alexa Fluor 和 DyLight 系列。

a. FITC標記

化學(xué)邏輯：OA–OH（酯化）或OA–COOH（酰胺）與FITC異硫氰酸基反應(yīng)，標記后熒光在激發(fā) ~490 nm，發(fā)射 ~520 nm。

特點：成本低、常規(guī)顯微鏡通用，熒光強度適中，但光漂白較明顯 。

b. Cy5/Cy5.5標記

方案：利用Cy NHS酯與OA的羧基反應(yīng)生成Cy5-OA/Cy5.5-OA。

優(yōu)勢：近紅外激發(fā)（≈650–700 nm）、發(fā)射（≈670–720 nm），背景低、穿透深 。

應(yīng)用實例：Cy5-OA用于小鼠原位腫瘤成像，在腫瘤部位熒光信號明顯高于肝臟，適合實時監(jiān)測藥物富集 。

c. 其他染料

Alexa Fluor 647、DyLight 650/680 可用于多通道成像。

標簽效率高、光穩(wěn)定性優(yōu)；需根據(jù)儀器適配激發(fā)源。

2. 實驗流程與注意事項

合成條件：OA與熒光NHS酯（Cy5、FITC等）在干燥DMSO或DMF中，加入堿性助劑（如TEA或DIPEA），室溫2–4?h。

純化步驟：反應(yīng)后用硅膠柱或半制備HPLC純化，確認單峰。

表征確認：

MS 或 HR-MS 確認分子量變化；

熒光光譜檢測標記效率；

核磁確認關(guān)鍵官能團的結(jié)合（酰胺或酯鍵形成）。

生物應(yīng)用：細胞/動物實驗前確保去除游離染料，并檢測細胞毒性（MTT、CCK-8）。

3. 應(yīng)用示例

細胞成像：Cy5-OA可用于共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)定位，如共定位線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)或脂滴 。

體內(nèi)成像：通過小動物活體熒光成像儀，可用于評估藥物分布及積累。術(shù)中導(dǎo)航、腫瘤動態(tài)監(jiān)測具有潛力 。

代謝機制研究：熒光強度變化反映OA釋放、代謝情況。 

用途：僅應(yīng)用于科研，不能用于人體實驗！

以上資料由小編zhn提供，僅用于科研

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