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          FITC-胰蛋白酶用于切割蛋白質(zhì)的特定肽鍵
          發(fā)布時間:2025-06-25     作者:zyl   分享到:

          FITC-胰蛋白酶(Fluorescein Isothiocyanate-labeled Trypsin)是胰蛋白酶(Trypsin)與熒光染料異硫氰酸熒光素(FITC)共價結(jié)合形成的熒光標(biāo)記酶。

          胰蛋白酶是一種廣泛使用的蛋白水解酶,主要用于切割蛋白質(zhì)的特定肽鍵,而FITC作為一種綠色熒光染料,通過其異硫氰酸基團(tuán)與胰蛋白酶的賴氨酸殘基等氨基形成共價鍵,實(shí)現(xiàn)胰蛋白酶的熒光標(biāo)記。

          組成與性質(zhì)

          胰蛋白酶(Trypsin)

          胰蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶,能夠選擇性地切割賴氨酸和精氨酸的羧基端肽鍵,常用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)研究中的蛋白質(zhì)消化、細(xì)胞脫離等過程。

          FITC標(biāo)記

          FITC分子通過異硫氰酸基團(tuán)與胰蛋白酶的游離氨基共價結(jié)合,賦予胰蛋白酶熒光特性,激發(fā)波長約490 nm,發(fā)射波長約520 nm,便于熒光檢測。

          FITC-胰蛋白酶

          性質(zhì)特點(diǎn)

          熒光活性

          FITC-胰蛋白酶具有強(qiáng)烈的綠色熒光信號,便于在熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)及熒光板讀數(shù)儀中檢測。

          酶活性保留

          經(jīng)過FITC標(biāo)記后,胰蛋白酶通常保留其酶學(xué)活性,能夠繼續(xù)執(zhí)行蛋白水解功能,但標(biāo)記程度過高可能對活性有一定影響。

          水溶性好

          FITC-胰蛋白酶在水溶液中穩(wěn)定,適合多種生物實(shí)驗(yàn)條件。

          共價結(jié)合穩(wěn)定

          FITC與胰蛋白酶形成的硫脲鍵較為穩(wěn)定,保證熒光信號的持久性,但需注意避免強(qiáng)光照射和極端pH以防熒光淬滅。

          使用注意事項

          保存條件

          FITC-胰蛋白酶應(yīng)避光保存,通常置于4℃冷藏,以保持酶活性和熒光強(qiáng)度。

          緩沖液選擇

          使用適宜的緩沖體系(pH 7-8)以維持酶的穩(wěn)定性和熒光性能。

          酶活性監(jiān)測

          標(biāo)記后需確認(rèn)酶活性,避免因標(biāo)記過度導(dǎo)致活性喪失。

          避免光漂白

          操作時避免長時間強(qiáng)光照射,減少熒光淬滅現(xiàn)象。

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