核酸染料SYBR Green I

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本品用DMSO溶解，因?yàn)镈MSO熔點(diǎn)是18.3℃，使用前請(qǐng)放置到室溫充分溶解。

操作步驟（僅供參考）：

一、膠染法（用法通EB）( 推薦方法，見(jiàn)圖1)

1、制膠時(shí)加入SYBR Green I 核酸染料。冷卻膠到 50℃左右，每100ml膠中加入1-3?l

SYBR Green I核酸染料（見(jiàn)圖 1）。

2、按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳即可。

3、用紫外凝膠透射儀或可見(jiàn)光透射儀觀測(cè)。藍(lán)光可透過(guò)玻璃，觀測(cè)聚丙烯酰胺凝膠時(shí)，

可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見(jiàn)光透射儀內(nèi)觀測(cè)。

需要注意的是：此方法染色能準(zhǔn)確確定片段分子量且用量較少。1ml 染料可以做 1000 塊10 ml 膠，每塊膠點(diǎn)50個(gè)樣，可做50000次。

二、點(diǎn)染法（見(jiàn)圖3）

1、該方法適于瓊脂糖凝膠電泳和PAGE凝膠電泳。

2、工作液的配制：用電泳緩沖液將10000×的SYBR Green I 稀釋100倍，即為SYBR Green

I 工作液。SYBR Green I 工作液可以置2～8℃保存一個(gè)月以上， 濃縮液在-20℃保存半年。

3、制膠：按常規(guī)方法制膠，不含任何染料。

4、樣品染色：向分析樣品中加入SYBR Green I 工作液和載樣緩沖液，室溫放置10分鐘，

使SYBR Green I 與樣品中DNA充分結(jié)合。SYBR Green I 工作液加入量為總上樣量的1/5～

1/10。

5、DNA Marker染色：將5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀釋液和1μL SYBR Green

I 工作液混勻，室溫放置5分鐘，使SYBR Green I 與DNA充分結(jié)合。

6、上樣、電泳：按常規(guī)操作。用紫外凝膠透射儀或可見(jiàn)光透射儀觀測(cè)。藍(lán)光可透過(guò)玻

璃，觀測(cè)聚丙烯酰胺凝膠時(shí)，可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見(jiàn)光透射儀內(nèi)觀測(cè)。

注意：用點(diǎn)染法染色時(shí)，染料用量少。通常點(diǎn)一個(gè)樣加入 1?L 即可，可以

使用 10000 次， 但大片段稍有滯后現(xiàn)象，如果需要更準(zhǔn)確確定分子量(與Marker對(duì)比)，建議使用膠染法。

三、泡染法

1、按照常規(guī)方法進(jìn)行制膠，其中不含任何染料。

2、用 pH 7.0 - 8.5 的緩沖液(如：TAE， TBE)，按照 1﹕1000 的比例稀釋SYBR Green

I 核酸染料，混勻，制成染色溶液。

3、將染色溶液倒入合適的聚丙烯容器中，放入凝膠，用鋁箔等蓋住容器使染料避光。室

溫振蕩染色 10-30 分鐘，染色時(shí)間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直 接在玻璃平

皿上染色，將配好的稀釋溶液輕輕地倒在膠板上，讓稀釋液均勻地覆 蓋整個(gè)膠板，并染色 30

分鐘。玻璃平皿必須預(yù)先經(jīng)過(guò)硅烷化溶液處理（避免染料吸附在玻璃表面上）。

4、用紫外凝膠透射儀或可見(jiàn)光透射儀觀測(cè)。藍(lán)光可透過(guò)玻璃，觀測(cè)聚丙烯酰胺凝膠時(shí)，

可直接將托有凝膠的玻璃平皿放入可見(jiàn)光透射儀內(nèi)觀測(cè)。

需要注意的是：用泡染方法染色時(shí)，可以確定核酸片段分子量。但是三種方法中染料用量的。

幾種染色方法特點(diǎn)比較:

儲(chǔ)存條件：2-8℃避光干燥可保存24個(gè)月

注意事項(xiàng)：

1、 Sybr Green 核酸染料樣品點(diǎn)染方法中，電泳不要超過(guò) 2 小時(shí)，以免核酸染料從 DNA/RNA 上分離出來(lái)，產(chǎn)生彌散狀條帶。

2、用點(diǎn)染方法染色時(shí)，條帶稍有滯后現(xiàn)象，如果需要確定片段分子量（和 Marker 對(duì)比），建議用膠染法和泡染法。

3、常規(guī)用酒精沉淀核酸過(guò)程中，SYBR Green I 核酸染料可以全部從核酸上去掉。

4、DNA電泳請(qǐng)選擇SYBR Green I 染料，RNA 電泳請(qǐng)選擇SYBR Green II染料，兩種染料不通用。

5、SYBR Green I 核酸染料對(duì)玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議在稀釋、貯存、染 色等使用過(guò)程中用聚丙烯類容器。

可以加Orange Red 作為標(biāo)記. pH值在7.5-8.3之間,不要微波加熱,加入熱膠的溫度低于50度。

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異魯米諾ABEI-DSC

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