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一文了解熒光標(biāo)記肽核酸PNA
一文了解熒光標(biāo)記肽核酸PNA
肽核酸 (Peptide Nucleic Acid,PNA) 是一種人工合成的類似于 DNA 或 RNA的聚合物。與多肽類似,各種嘌呤和嘧啶堿基通過亞甲基羰基連接到主鏈骨架上。由于PNA不帶負(fù)電荷,與DNA和RNA之間不存在靜電斥力,因而結(jié)合的穩(wěn)定性和特異性都大為提高。不易被DNA酶和蛋白酶水解,
熒光標(biāo)記標(biāo)記PNA
PNA鏈5’端和3’端均可以標(biāo)記。由于3' 端是非活性基團(tuán)(-CONH2),所以需加入一個(gè)賴氨酸,其側(cè)鏈上的氨基可以用來標(biāo)記。
如果在5' 端標(biāo)記,我們建議在PNA 和標(biāo)記物之間加 1-2 O linkers。
標(biāo)記物:熒光基團(tuán)(—NHS酯或羧基酰胺)、生物素、棕櫚酸、地高辛、DABCYL、疊氮化物、亞甲基藍(lán)、巰基等。
<常見的熒光標(biāo)記>
Dye | Ex (nm) | Em (nm) | Dye | Ex (nm) | Em (nm) |
FAM | 492 | 518 | ATTO425 | 436 | 484 |
FITC | 492 | 518 | AlexaFlour488 | 494 | 517 |
OregoneGreen488 | 498 | 526 | TAMRA | 553 | 576 |
Cy3 | 550 | 570 | TexasRed | 492 | 576 |
Alexa546 | 556 | 573 | Atto550 | 554 | 574 |
AlexaFlour532 | 530 | 555 | Atto647N | 644 | 667 |
Cy5 | 650 | 670 | Alexa647 | 650 | 668 |
Thiazol Orange | 510 | 530 | Dabcyl | 454 | |
JOE | 520 | 548 | BHQ-2 | 560-670 |