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DH10Bac甘油菌，是收集生長(zhǎng)在對(duì)數(shù)期的DH10Bac菌，加入含有甘油的細(xì)菌凍存液制備而成�？梢灾苯觿澠桨寤蛐×�、大量培養(yǎng)。

DH10Bac是昆蟲(chóng)桿狀病毒Bac-to-Bac系統(tǒng)中常用的同源重組大腸桿菌菌株。該菌株含有桿狀病毒穿梭載體(baculovirus shuttle vector) bMON14272(俗稱bacmid，其含有一個(gè)轉(zhuǎn)座反應(yīng)必須的mini-attTn7重組位點(diǎn))和一個(gè)輔助質(zhì)粒pMON7124(用于表達(dá)轉(zhuǎn)座所需的轉(zhuǎn)座蛋白)。DH10Bac主要用作pFastBac等類似載體轉(zhuǎn)化的宿主菌株。當(dāng)pFastBac重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入DH10Bac細(xì)胞后，pFastBac載體上的mini-Tn7位點(diǎn)和DH10Bac宿主菌中bacmid上的mini-attTn7位點(diǎn)之間發(fā)生轉(zhuǎn)座(transposition)，產(chǎn)生重組的bacmid。重組的bacmid在轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞后可產(chǎn)生含有重組子的桿狀病毒，后者進(jìn)一步感染昆蟲(chóng)細(xì)胞后即可啟動(dòng)外源重組蛋白的表達(dá)。

DH10Bac宿主包含的bacmid bMON14272含小型F復(fù)制子，卡那霉素抗性基因，mini-attTn7位點(diǎn)和lacZα互補(bǔ)因子(可通過(guò)藍(lán)白斑篩選)；輔助質(zhì)粒pMON7124包含四環(huán)素抗性和tnsABCD區(qū)域，該區(qū)域表達(dá)轉(zhuǎn)座反應(yīng)所需的轉(zhuǎn)座蛋白。攜帶T7轉(zhuǎn)座原件(Tn7 element)的供體質(zhì)粒pFastBac (donor pFastBac plasmid)帶有慶大霉素抗性基因，桿狀病毒多角體啟動(dòng)子，多克隆位點(diǎn)區(qū)域和SV40的多腺苷酸化信號(hào)。

DH10Bac菌株具有卡那霉素抗性和四環(huán)素抗性，pFastBac質(zhì)粒具有慶大霉素(Gentimicin)抗性和氨芐青霉素抗性。

DH10Bac菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ-rpsL nupG / pMON14272 / pMON7124。

重組后的克隆用藍(lán)白斑進(jìn)行篩選，重組成功的克隆在含有卡那霉素和四環(huán)素抗性的IPTG/X-Gal LB平板上呈現(xiàn)為白色菌落。

本菌株可以使用常規(guī)的LB培養(yǎng)基或SOC培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

保存條件：

-20℃保存，一年**。-80℃可以長(zhǎng)期保存。

注意事項(xiàng)：

使用本甘油菌時(shí)可以不必完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降。在沒(méi)有結(jié)凍的情況下，菌體會(huì)逐漸沉淀至管底，請(qǐng)務(wù)必注意適當(dāng)混勻后使用。

為保證菌種純正，避免其它細(xì)菌污染，盡量先劃平板然后再挑單克隆菌落進(jìn)行后續(xù)操作。

本產(chǎn)品僅限于**人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或**，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。

為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。