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特性：

**連接粘性末端和平末端

T/A 克隆

dsDNA 切刻修復(fù)

構(gòu)建高豐度克隆文庫(kù)

RNA 和 DNA 的連接

概述：

該酶催化雙鏈 DNA 或 RNA 上相鄰的 5′-磷酸末端和 3′-羥基末端形成磷酸二酯鍵。該酶不僅能夠催化平齊末端或粘性末端之間的連接，還可以修復(fù)雙鏈 DNA、RNA 或 DNA/RNA 雜交雙鏈中的單鏈切刻。

來(lái)源：

純化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

反應(yīng)條件：

1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液

[50 mM Tris-HCl（pH 7.5 @ 25℃），10 mM MgCl2，10 mM DTT，1 mM ATP]。推薦 DNA 5′ 末端濃度為 0.1-1.0 μM，16℃ 溫育。

熱失活：65℃ 10 分鐘。

單位定義（粘性末端活性單位）：

1 單位指在 20 μl 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液中，16℃ 反應(yīng)條件下，30 分鐘能使 50% 的經(jīng) HindⅢ 消化的λDNA 片段 [ 5′ 端濃度為 0.12 μM（300 μg/ml）] 連接所需的酶量。

注意事項(xiàng)：

與 E. coli DNA 連接酶需要 NAD+ 作輔因子不同，T4 DNA 連接酶的輔因子是 ATP。

稀釋后的 T4 DNA 連接酶應(yīng)于 -20℃、50% 甘油貯存緩沖液（稀釋緩沖液 A，NEB #B8001）中保存。如稀釋后馬上使用，也可用 1X T4 DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液稀釋。

只要在反應(yīng)體系中補(bǔ)加 1 mM ATP，連接反應(yīng)就可以在 NEB 提供的四種限制性?xún)?nèi)切酶緩沖液或在

T4 DNA 多聚核苷酸激酶反應(yīng)緩沖液中進(jìn)行。