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一、概述

Magarose-DEAE是一種弱陰離子交換磁珠，具有快速的磁響應(yīng)性、豐富的離子交換能力和**蛋白結(jié)合能力。離子交換配基為二乙氨乙基（diethylaminoethyl，DEAE），該配基在pH 3-12的工作范圍內(nèi)仍然能夠保持穩(wěn)定的高蛋白結(jié)合能力。Magarose-DEAE磁珠無(wú)需對(duì)粗蛋白樣品進(jìn)行預(yù)處理（如：反復(fù)繁瑣的離心，費(fèi)時(shí)費(fèi)力的過(guò)濾操作），此外，無(wú)需控制流速及柱壓，不需要昂貴的層析設(shè)備。對(duì)熟練的操作者，在短時(shí)間內(nèi)就能完成高純度目的蛋白的提取，且能輕松實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣品的平行處理，實(shí)現(xiàn)高通量的蛋白純化。

二、產(chǎn)品特性

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三、使用方法

1. 產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

   磁響應(yīng)速度快，減少操作時(shí)間；

   磁珠具良好分散性和重懸性，提高操作的便捷性；

   配基具有良好的物理化學(xué)穩(wěn)定性，提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性及可重復(fù)性；

2. 操作流程（以純化含BSA蛋白樣品為例）

1)        磁珠預(yù)處理（平衡）：將磁珠漩渦振蕩30 s，充分重懸；取一定量的25 %（v/v）磁珠懸液置于50 mL離心管中。磁分離，棄上清液，加入20 mL 平衡緩沖液洗滌磁珠3次，每次垂直混合2 min。

注：為獲得目標(biāo)蛋白的**回收率，實(shí)驗(yàn)者需加入過(guò)量磁珠，一般大于蛋白結(jié)合量的20%即可。對(duì)于含較低豐度目標(biāo)蛋白的樣品中，磁珠對(duì)目標(biāo)蛋白的回收率會(huì)有所降低，因此要繼續(xù)增大磁珠的用量；

2)        蛋白吸附：將預(yù)處理的磁珠加入含BSA蛋白的樣品溶液中，漩渦振蕩30 s，置于垂直混合儀混勻30~60 min，使樣品和磁珠充分接觸并吸附，然后進(jìn)行磁分離，移棄上清液。

注：為更**的吸附結(jié)合物質(zhì)，平衡緩沖液**含較低離子強(qiáng)度，選擇pH值應(yīng)至少與目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)相差一個(gè)pH單位，選定鹽緩沖液pH波動(dòng)在0.5 pH以?xún)?nèi)。目標(biāo)蛋白與磁珠吸附時(shí)間與蛋白本身屬性有關(guān)。

3)        磁珠洗滌：加入20 mL的平衡緩沖液，漩渦振蕩重懸磁珠30 s后磁分離，移棄上清；該操作重復(fù)3次。

4)        蛋白洗脫：在上述完成磁珠洗滌的離心管中加入適量洗脫液進(jìn)行蛋白洗脫。迅速重懸磁珠，然后將離心管置于垂直混合儀混勻10~15 min后磁性分離，收集上清液至新的離心管中。洗脫方式主要有高鹽濃度洗脫（含1-2 M的NaCl的平衡緩沖液）和低pH洗脫（選擇低于目標(biāo)蛋白等電點(diǎn)的pH范圍即可）兩種。

5)        磁珠再生：一般用2 M NaCl溶液洗滌3~5次，然后用平衡緩沖液進(jìn)行再平衡。磁珠多次使用后有沉淀蛋白、強(qiáng)疏水性蛋白、脂蛋白等雜質(zhì)非特異性吸附到磁珠上，為保證磁珠使用效率，建議在位清洗（CIP）。

6)        在位清洗（CIP）：依次采用 1.0 M NaOH、70%乙醇或30%異丙醇、純水洗滌磁珠2次；最后加入20%乙醇重懸磁珠，置于2~8℃保存。