熒光染料是指吸收紫外線或可見(jiàn)光后發(fā)射波長(zhǎng)較長(zhǎng)的可見(jiàn)光的物質(zhì),大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。其用途廣泛,醫(yī)學(xué)上可用于進(jìn)行基因檢測(cè)、分類與識(shí)別,尤其在單分子技術(shù)中。熒光染料也起到了重要作用由于其高靈敏度、操作方便等優(yōu)點(diǎn)熒光染料作為標(biāo)記物已廣泛應(yīng)用于熒光免疫、熒光探針、細(xì)胞染色等多個(gè)方面。很多單分子技術(shù),如熒光共振能量轉(zhuǎn)移、雙光子融合技術(shù)等,運(yùn)用染料分子來(lái)標(biāo)記待測(cè)物質(zhì),測(cè)得其熒光光譜從而闡述DNA轉(zhuǎn)錄、RNA聚合、動(dòng)力蛋白和蛋白質(zhì)折疊機(jī)理。
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一、FITC的特性
異硫氰酸熒光素(FITC)呈黃色、橙黃色或褐黃色粉末或結(jié)晶,性質(zhì)穩(wěn)定,在室溫下能保存兩年以上,在低溫中可保存多年。易溶于水和酒精。吸收光譜為490~495nm,發(fā)射光譜為520~530nm,呈現(xiàn)黃綠色熒光,分子量為398.4.
在堿性條件下(pH8.5以上),F(xiàn)ITC的異硫酸基在水溶液中與免疫球蛋白的自由氨基經(jīng)碳酰胺化而形成硫碳氨基鍵,成為標(biāo)記熒光免疫球蛋白,即熒光抗體。一個(gè)Ig分子上能標(biāo)記15~20個(gè)FITC分子。
FITC有兩種異構(gòu)體:
異構(gòu)體 I, 即 5-異硫氰酸熒光素 或 5-FITC
異構(gòu)體 II, 即 6-異硫氰酸熒光素 或 6-FITC
異硫氰酸熒光素通常是由其中一種異構(gòu)體或者有時(shí)是兩種異構(gòu)體的混合物構(gòu)成(混合物的CAS編號(hào)為27072-45-3)。早在1942年,F(xiàn)ITC首次用于抗體標(biāo)記。[1]
由于異硫氰酸酯基團(tuán)的存在以及其高熒光性,F(xiàn)ITC常用于蛋白質(zhì)或多糖等多種底物的標(biāo)記試劑。異硫氰酸酯在溫和條件下與親核試劑,例如胺,極易反應(yīng)。
圖1. FITC異構(gòu)體1的結(jié)構(gòu)式。FITC異構(gòu)體1 (5-異硫氰酸熒光素) 在5位上含異硫氰酸酯基團(tuán)。
光譜性質(zhì):
FITC在λ= 495 nm處有激發(fā)波長(zhǎng),在λ = 519 nm處有發(fā)射波長(zhǎng) (參見(jiàn)圖2) [2]。.該化合物是黃色的,而發(fā)射光則是綠色的。FITC兩種異構(gòu)體的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)的差別是很小的。FITC標(biāo)記的功能性生物聚合物,如FITC標(biāo)記葡聚糖,具有與母體分子相似的激發(fā)和發(fā)射特性,使FITC成為熒光標(biāo)記的理想載體。
圖 2. FITC異構(gòu)體I的激發(fā)(橙色) 和發(fā)射(藍(lán)色)光譜。在495 nm處有大激發(fā)波長(zhǎng),在 519 nm處有大發(fā)射波長(zhǎng)。
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以上來(lái)自小編zhn2020.10.29
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