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          一文帶你了解6-異硫氰酸熒光素 或 6-FITC和5-FITC
          發(fā)布時(shí)間:2020-10-29     作者:zhn   分享到:

          熒光染料是指吸收紫外線或可見(jiàn)光后發(fā)射波長(zhǎng)較長(zhǎng)的可見(jiàn)光的物質(zhì),大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。其用途廣泛,醫(yī)學(xué)上可用于進(jìn)行基因檢測(cè)、分類與識(shí)別,尤其在單分子技術(shù)中。熒光染料也起到了重要作用由于其高靈敏度、操作方便等優(yōu)點(diǎn)熒光染料作為標(biāo)記物已廣泛應(yīng)用于熒光免疫、熒光探針、細(xì)胞染色等多個(gè)方面。很多單分子技術(shù),如熒光共振能量轉(zhuǎn)移、雙光子融合技術(shù)等,運(yùn)用染料分子來(lái)標(biāo)記待測(cè)物質(zhì),測(cè)得其熒光光譜從而闡述DNA轉(zhuǎn)錄、RNA聚合、動(dòng)力蛋白和蛋白質(zhì)折疊機(jī)理。


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          一、FITC的特性

          異硫氰酸熒光素(FITC)呈黃色、橙黃色或褐黃色粉末或結(jié)晶,性質(zhì)穩(wěn)定,在室溫下能保存兩年以上,在低溫中可保存多年。易溶于水和酒精。吸收光譜為490~495nm,發(fā)射光譜為520~530nm,呈現(xiàn)黃綠色熒光,分子量為398.4.

          在堿性條件下(pH8.5以上),F(xiàn)ITC的異硫酸基在水溶液中與免疫球蛋白的自由氨基經(jīng)碳酰胺化而形成硫碳氨基鍵,成為標(biāo)記熒光免疫球蛋白,即熒光抗體。一個(gè)Ig分子上能標(biāo)記15~20個(gè)FITC分子。

          FITC有兩種異構(gòu)體:

          異構(gòu)體 I, 即 5-異硫氰酸熒光素 或 5-FITC

          異構(gòu)體 II, 即 6-異硫氰酸熒光素 或 6-FITC

          異硫氰酸熒光素通常是由其中一種異構(gòu)體或者有時(shí)是兩種異構(gòu)體的混合物構(gòu)成(混合物的CAS編號(hào)為27072-45-3)。早在1942年,F(xiàn)ITC首次用于抗體標(biāo)記。[1]

          由于異硫氰酸酯基團(tuán)的存在以及其高熒光性,F(xiàn)ITC常用于蛋白質(zhì)或多糖等多種底物的標(biāo)記試劑。異硫氰酸酯在溫和條件下與親核試劑,例如胺,極易反應(yīng)。

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          圖1. FITC異構(gòu)體1的結(jié)構(gòu)式。FITC異構(gòu)體1 (5-異硫氰酸熒光素) 在5位上含異硫氰酸酯基團(tuán)。


          光譜性質(zhì):

          FITC在λ= 495 nm處有激發(fā)波長(zhǎng),在λ = 519 nm處有發(fā)射波長(zhǎng) (參見(jiàn)圖2) [2]。.該化合物是黃色的,而發(fā)射光則是綠色的。FITC兩種異構(gòu)體的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)的差別是很小的。FITC標(biāo)記的功能性生物聚合物,如FITC標(biāo)記葡聚糖,具有與母體分子相似的激發(fā)和發(fā)射特性,使FITC成為熒光標(biāo)記的理想載體。

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          圖 2. FITC異構(gòu)體I的激發(fā)(橙色) 和發(fā)射(藍(lán)色)光譜。在495 nm處有大激發(fā)波長(zhǎng),在 519 nm處有大發(fā)射波長(zhǎng)。


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          92557-80-7

          6-Carboxyfluorescein succinimidyl ester; 6-FAM, SE ;6-Carboxyfluorescein-NHS ester

          92557-81-8

          5(6)-FITC, 5(6)-Fluorescein  27072-45-3

          5-FITC,5-Fluorescein  3326-32-7

          6-FITC,6-Fluorescein  3326-31-6

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          6-Carboxytetramethylrhodamine;6-TAMRA, 6-羧甲基羅丹明  91809-67-5

          5(6)-Carboxytetramethylrhodamine succinimidyl ester;5(6)-TAMRA-NHS ester 246256-50-8

          5-Carboxytetramethylrhodamine succinimidyl ester;5-TAMRA-NHS ester 5-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞胺酯,5-TAMRA, SE 150810-68-7

          6-Carboxytetramethylrhodamine succinimidyl ester;6-TAMRA-NHS ester 6-羧基四甲基羅丹明琥珀酰亞胺酯,6-TAMRA, SE  150810-69-8

          1,4-dichloro 5-Carboxytetramethylrhodamine   198546-47-3

          1,4-dichloro 6-Carboxytetramethylrhodamine407581-83-3

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          5(6)-Carboxy-X-rhodamine; 5(6)-ROX198978-94-8

          Rhodamine 101;Rhodamine 64064339-18-0

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