抗體偶聯(lián)**（ADC）是一類新型的化學(xué)藥物，其包含單克隆抗體（mAb），該單克隆抗體可選擇性結(jié)合與與細(xì)胞藥物性小分子藥物載荷相關(guān)的藥物相關(guān)抗原。使用可裂解的酶接頭將藥物小分子藥物載荷附著于抗體。為了確定高度**特異性的mAb，功效是抗****以及在循環(huán)中穩(wěn)定但允許快速裂解以在ADC被細(xì)胞吸收后釋放細(xì)胞殺傷性**的連接物，科學(xué)家已經(jīng)付出了很多努力。已經(jīng)研究了30多個(gè)靶點(diǎn)，并且在臨床開發(fā)的各個(gè)階段，現(xiàn)在有20多個(gè)ADC藥物，包括Trastuzumab-DM1（Roche），SGN-35（Seattle Genetics），HuN901-DM1（ImmunoGen），CR011-vcMMAE（Celidex Therapeutics） ），SAR3419（Sanofi-Aventis），CMC-544（Pfizer），和BIIB015（Biogen Idec）等等。

ADC藥代動(dòng)力學(xué)方法的評(píng)估

ADC是一種異質(zhì)混合物，包含具有不同****載荷的單克隆抗體混合物。由于這種異質(zhì)性，配體結(jié)合測(cè)定（LBA）通常用于ADC生物學(xué)分析。分析方法使用了多種平臺(tái)，包括比色酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定，光測(cè)定和基于電化學(xué)發(fā)光的蛋白分析儀。總抗體測(cè)定法可用于定量測(cè)定結(jié)合或不結(jié)合**的總抗體。靶向**抗原，抗獨(dú)特型mAb，抗人免疫球蛋白（IgG）（Fab'），并且抗人IgG（Fc）抗體可用作捕獲試劑。然后將抗人IgG（Fab'）使用辣根過氧化物酶（HRP）或抗人IgG（Fc）-HRP或具有鏈霉親和素-HRP的生物素化抗人抗體用于檢測(cè)（見下圖1）。

為了消除非特異性結(jié)合，猴吸附抗人IgG抗體通常用于非人靈長類動(dòng)物研究。取決于接頭的類型，**結(jié)合的位置可位于（Fab'）或載體抗體的鉸鏈區(qū)上。**結(jié)合的化學(xué)計(jì)量可能會(huì)影響ADC捕獲或檢測(cè)試劑的結(jié)合，并顯著影響測(cè)定性能。而且，即使結(jié)合位點(diǎn)沒有被直接阻斷，某些測(cè)定形式對(duì)**負(fù)荷也很敏感。據(jù)報(bào)道，不同的測(cè)定形式會(huì)產(chǎn)生不同的藥代動(dòng)力學(xué)（PK），并顯著影響關(guān)鍵PK參數(shù)的計(jì)算，例如清除率和**暴露。似乎大多數(shù)測(cè)定形式對(duì)**負(fù)荷非常敏感。

對(duì)于綴合的抗體LBA，將抗細(xì)胞*性**抗體用作捕捉劑或檢測(cè)劑，并與上文概述的捕捉劑和檢測(cè)劑配對(duì)，以測(cè)量綴合至少一種**的抗體（參見下圖2）。

結(jié)合抗體測(cè)定法的優(yōu)點(diǎn)在于它們能夠量化循環(huán)中ADCs可能造成的**逐步損失。但是，使用抗**抗體進(jìn)行檢測(cè)時(shí)應(yīng)格外小心，因?yàn)橛糜跈z測(cè)的ADC標(biāo)準(zhǔn)材料相比，ADC的體內(nèi)載藥量可能會(huì)發(fā)生變化。

ADC的成功設(shè)計(jì)是在循環(huán)中高**連接物的穩(wěn)定性與**的**內(nèi)細(xì)胞*性**釋放的結(jié)合。循環(huán)中從載體抗體中非特異性釋放**仍然是決定ADC半衰期的關(guān)鍵因素。為了測(cè)量已從載體抗體釋放的**部分（即游離**），可以將競(jìng)爭(zhēng)性LBA包被用于捕獲的抗藥抗體和恒定濃度的HRP-**一起用作報(bào)告基因（參見下圖3）。

因?yàn)閺腁DC釋放的游離**的清除速度比ADC自身的清除速度快得多，所以可能無法檢測(cè)到游離**。為了解決這個(gè)問題，可以測(cè)量與ADC結(jié)合的剩余**。通過使用組織蛋白酶B消化釋放先前與載體抗體結(jié)合的**，然后通過競(jìng)爭(zhēng)性LBA分析或LC-MS定量游離**來實(shí)現(xiàn)此測(cè)量。

理想情況下，應(yīng)在ADC開發(fā)和表征的早期階段開發(fā)用于非臨床PK生物學(xué)分析的測(cè)定方法。與平均DAR標(biāo)準(zhǔn)相比，可以通過測(cè)定富集或純化的**抗體比率（DAR）分?jǐn)?shù)的回收率來進(jìn)行分析評(píng)估，以確保不同的分析形式均等地回收**。如果無法進(jìn)行此分析，則對(duì)于生物分析方法的設(shè)計(jì)，ADC的作用機(jī)理，靶向的**抗原，接頭的類型，**抗體比率，細(xì)胞*性**等的詳細(xì)信息是必需的。除了LBA方法外，親水相互作用色譜（HILIC），HPLC和LC-MS還用于定量ADC。