抗-PEG瓊脂糖親和純化mPEG-BSA的方法

（1）9B5 抗-聚乙二醇瓊脂糖(3ml)和150mM氯化鈉,10mM磷酸鈉,0.1%疊氮鈉pH7.2(磷酸緩沖溶液PBS)在內徑1cm的柱子內混合均勻直至平衡。

（2）1.0毫升含有0.125毫克90%純的20kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白和0.5毫克人肌紅蛋白混合物在磷酸緩沖溶液PBS中加入柱子中。

（3）柱子用每次2毫升PBS沖洗，共4次。

（4）用每次1毫升含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的50%磷酸緩沖液洗脫，共9次。

（5）組分使用聚丙烯酰胺凝膠電泳測定在12.5% Laemmli 迷你凝膠上跑膠分析。

結果

如圖所示,20 kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白結合9B5抗-聚乙二醇瓊脂糖,對照過柱的未結合聚乙二醇的蛋白質，包括牛血清白蛋白和人肌紅蛋白。純20kDa甲氧基聚乙二醇-牛血清白蛋白使用含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的緩沖溶液進行洗脫。

圖1.考馬斯藍染色SDS-PAGE凝膠電泳顯示1道為柱載，經9B5抗-聚乙二醇親和純化過的20kda的使用含25%乙二醇和1%聚乙二醇8000的緩沖溶液進行洗脫。2-6道，為過流部分和洗滌部分。7-9道，為洗脫部分。

注意事項

（1）在與抗-聚乙二醇瓊脂糖進行結合前，應確保樣品不含未結合聚乙二醇。

（2）聚乙二醇集合蛋白質可以使用25%乙二醇而無需聚乙二醇8000進行洗脫，但需要用到更多的緩沖溶液。乙二醇隨后很容易通過透析除去。

（3）使用含25%乙二醇的磷酸緩沖液（約20倍柱體積）沖洗，然后在PBS中再次平衡，很容易再生9B5抗-聚乙二醇瓊脂糖。