SOSG證實能用來檢測溶液和植物組織中的單線態(tài)氧(1O2)。

　　活性氧引起的許多生理損傷都可能歸因于單線態(tài)氧(1O2)，包括與脫氧鳥苷選擇性反應(yīng)形成8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)的核酸修飾。單線態(tài)氧的壽命足夠長(水中有4.4μs)使其能夠充分擴散進入細胞和組織。單線態(tài)氧通過在1270nm處具弱化學發(fā)光的**特征直接被檢測。實驗室中通常用三種之一的方法來生成單線態(tài)氧：

　　①使用感光染料對二氧(3O2)進行光化學反應(yīng)來制備;

　　②通過對一種過氧化物或二氧環(huán)丁烷進行加熱分解制備;

　�、垩鯕饬鲀�(nèi)通過微波放電來制備。

　　SOSG高度選擇性結(jié)合單線態(tài)氧(1O2)。不像其他的熒光和化學發(fā)光的單線態(tài)氧檢測試劑，SOSG與其他活性氧物質(zhì)(ROS)，包括羥基自由基(·OH)、超氧陰離子(·O2–)和一氧化氮(NO)無可見反應(yīng)【見圖1】。

　　A)用熒光光度計(Ex/Em= 488/525nm)測定溶液內(nèi)的熒光，溶液內(nèi)含SOSG(1μM)和亞甲基藍(10μM)溶于100mMpH 7.5 Tris Buffer;單線態(tài)氧清除劑疊氮鈉(NaN3，1 mM);或50%D2O(重水，能夠延長1O2的壽命)。每20s完成一次熒光測定，每次測定間隔30s(如灰條標示)。在這30s的間隔中，樣本暴露于激光輻射(630–680 nm，<5 mW)，導致亞甲基藍光敏生成1O2。

　　B)用熒光光度計(Ex/Em=488/525nm)測定溶液內(nèi)的熒光，溶液為50mM pH 7 Tris buffer，1mM黃嘌呤，SOSG(1μM)，或含SOSG(1μM)，或含二氫羅丹明123。約20s之后，加入50 mU/mL黃嘌呤氧化酶(XO)。XO催化黃嘌呤的氧化，產(chǎn)生尿酸和超氧化物。超氧化物瞬間被H2O2降解。

　　熒光特征：

　　SOSG與單線態(tài)氧(1O2)反應(yīng)前，探針最初發(fā)弱藍色熒光，激發(fā)峰在372nm和393nm，發(fā)射峰在395nm和416nm。當含單線態(tài)氧(1O2)，探針發(fā)射綠色熒光，光譜特征類似于熒光素(**激發(fā)/發(fā)射波長約504/525nm)。

　　線性化關(guān)系：

　　SOSG的熒光產(chǎn)物在某些溶液中隨著時間被降解，且在不含單線態(tài)氧的堿性pH溶液中，SOSG會發(fā)熒光。不過，當進行適當?shù)牟僮鳎�綠色熒光信號的強度與單線態(tài)氧(1O2)含量相關(guān)，且不會受其他ROS的明顯干擾。

　　使用方法：

　　1.SOSG儲存液制備：收到貨按照≤-20℃避光干燥保存。用甲醇來制備儲存液，每100μg粉末加入33μL甲醇制備~5mM儲存液。正式實驗前制備工作液，不能用完的工作液需丟棄，不可保存后再用。

　　2.溶液檢測：SOSG不具細胞膜滲透性，設(shè)計用來檢測溶液環(huán)境內(nèi)的單線態(tài)氧。**的稀釋緩沖液和工作濃度需根據(jù)經(jīng)驗來調(diào)整。建議起始工作濃度為1-10μM。

　　保存：-20℃避光干燥保存，**期至少6個月

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