FITC熒光標(biāo)記的原理是什么？具體操作步驟如下：

　　(一)原理

　　目前用于抗體標(biāo)記的熒光素主要有異硫氰酸熒光素(Fluorescein isothiocynate，F(xiàn)ITC)或羅達(dá)明(Lissamine rhodamine B200，RB200)。在性條件下FITC的碳酰胺鍵可與抗體賴氨酸的E氨基共價(jià)結(jié)合，標(biāo)記后的抗體仍保持與相應(yīng)抗原結(jié)合的能力。在熒光燈源紫外線或蘭紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光，通過在熒光顯微鏡下觀察或流式細(xì)胞儀分析可對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位或定量的檢測(cè)。

　　(二)操作步驟

　　將純化的IgG抗體對(duì)PH9~9.5碳酸鹽緩沖液透析過夜，透析后抗體液移入小燒杯中稱取適量FITC，加入二甲亞碩(DMSO)(FITC-1mg/1ml DMSO)使終濃度為1mgFITC/1mlDMSO FITC/IgG比例：如IgG濃度為1mg/ml，F(xiàn)ITC/IgG比例約為50ugFITC/mgIgG;

　　如IgG為5~10mg/m1，則比例為25μgFITC/mlIgG 在10ml小燒杯中先放入抗體

　　按上述比例將FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗體溶液中將標(biāo)記物用PBS加至2.5m1，磁力攪拌器室溫下避光攪拌2h。

　　用PD10柱(SephadexG25柱)除去游離熒光素，先用25m1PBS淋洗G25柱收集PBS洗脫**個(gè)熒光素結(jié)合蛋白峰，測(cè)定F/P比值，**個(gè)熒光素峰為游離熒光素。

　　計(jì)算得：合適的F/P值為2~4。

　　(三)試劑器材

　　1.純化的多克隆抗體或單克隆抗體。

　　2.FITC(Fluorescein-5-Lsothiocyanalte)或其它熒光色素。

　　3.PBS、DMSO 4.PH9~9.5碳酸鹽緩沖液：Na:CO34.3g,NaHCO38.6g加蒸餾水至500ml。

　　5.PD10柱(SephadexG25柱)

　　6.磁力攪拌器，紫外分光光度計(jì)等

　　(四)注意事項(xiàng)

　　1.FITC保存于4℃D暗處，使用前待試劑瓶升至室溫時(shí)開蓋稱取，以避免潮解。

　　2.FITC-DMS0液要臨用時(shí)配制。

　　3.碳酸鹽緩沖液要新鮮配制。

        西安pg電子官方生物科技有限公司是一家集研發(fā)，生產(chǎn)，銷售為一體的高科技企業(yè)，可提供合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、順磁/超順磁性納米顆粒、納米金及納米金棒、近紅外熒光染料、活性熒光染料、熒光標(biāo)記的葡聚糖BSA和鏈霉親和素、蛋白交聯(lián)劑、小分子PEG衍生物、點(diǎn)計(jì)化學(xué)產(chǎn)品、樹枝狀聚合物、環(huán)糊精衍生物、大環(huán)配體類、熒光量子點(diǎn)、透明質(zhì)酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳納米管、富勒烯等等，可以滿足不同客戶的定制需求。

　　西安pg電子官方生物相關(guān)FITC現(xiàn)貨供應(yīng)：