糖脂作為生物表面活性劑、生物材料和生物活性分子,是生物技術(shù)和生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的靶標(biāo)分子。
一種用于生產(chǎn)糖甘油脂(GGL)的工程大腸桿菌菌株使用生殖支原體的MG517糖脂合酶將糖基從UDPGlc轉(zhuǎn)移到甘油二;荏w(Mora-Buyé et al., 2012)。
胞內(nèi)甘油二;厥荊GL生成的限制因素。在這里,我們?cè)O(shè)計(jì)了不同的代謝工程策略,通過(guò)調(diào)節(jié)脂肪酸、;w和磷脂酸的生物合成來(lái)提高糖脂合酶前體底物的可用性。
德莎的淘汰賽,褪色和fabR基因參與脂肪酸降解,超表達(dá)的轉(zhuǎn)錄監(jiān)管機(jī)構(gòu)FadR,;D(zhuǎn)移酶的PlsB和C,和焦磷酸酶鼎暉磷脂酸生物合成,以及磷酸酶PgpB轉(zhuǎn)換為二酰基甘油進(jìn)行了探討,目的是改善GGL滴度。
在不同的工程菌株中,MG517共表達(dá)的ΔtesA菌株和融合的PlsCxPgpB蛋白的產(chǎn)量最高,與單獨(dú)表達(dá)MG517的親本菌株相比,GGL滴度提高了350%。
通過(guò)過(guò)表達(dá)尿苷轉(zhuǎn)移酶GalU或敲除udp -糖二磷酸酶編碼基因ushA來(lái)提高UDPGlc的**性并沒(méi)有進(jìn)一步提高GGL的效價(jià)。大多數(shù)菌株產(chǎn)生的GGL含有從單糖到四糖的不同數(shù)量的葡萄糖基單位。
有趣的是,共表達(dá)Cdh的菌株GGL譜向二糖基化脂質(zhì)轉(zhuǎn)移(占GGLs總量的80%),而fadR敲除的菌株具有更多的不飽和;。
在所有情況下,GGL的產(chǎn)生改變了大腸桿菌膜的脂質(zhì)組成,觀察到GGL取代磷脂酰乙醇胺來(lái)維持膜的總體電荷平衡。
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