兩種常用蛋白純化的方法(Ni柱親和層析和離子交換層析)

蛋白純化技術(shù)是生物研究領(lǐng)域的一項(xiàng)重要技術(shù)。要研究某一個(gè)特殊蛋白質(zhì)，**就要將這個(gè)蛋白從生物體中分離純化出來(lái)。蛋白純化方法主要是利用不同蛋白質(zhì)間的相似性與差異，依據(jù)蛋白間的相似性可以去除非蛋白物質(zhì)，再根據(jù)蛋白質(zhì)的差異性將目的蛋白分離出來(lái)。在本文中，我們將介紹2種常用的蛋白純化的方法。

一、Ni柱親和層析

1、自制的簡(jiǎn)易柱子，直徑約為1cm，長(zhǎng)度約為2cm，在柱子的下端加入蒸餾水，并關(guān)閉柱子的出口。

2、將瓊脂糖凝膠倒入柱子，讓填料自然沉降，依次用二到五倍的柱子體積的無(wú)菌水、8mol/L的尿素、無(wú)菌水洗柱子。

3、緩慢加入5ml的硫酸鎳，至柱子的顏色由白色變?yōu)樗{(lán)色，待藍(lán)綠色收集液體滴下來(lái)為止。

4、用二到五倍體積的PBS緩沖液平衡柱子，再將粗蛋白樣品進(jìn)行上樣，用梯度濃度50mmol/L、70mmol/L、150mmol/L、250mmol/L咪唑進(jìn)行過(guò)柱，流速約為1ml/min。

5、以每個(gè)濃度用1.5ml的Eppendorf收集八管，再用二到五倍體積的無(wú)菌水洗柱子，再用二到五倍的50mmol/L的EDTA洗柱子，除去NiSO4，待至無(wú)色狀態(tài)

6、用多倍體積的無(wú)菌水進(jìn)行洗柱子，將手機(jī)液10%的分離膠進(jìn)行SDS—PAGE分析。

 二、離子交換層析

1、將macro prep High-Q強(qiáng)陰離子交換填料混勻，吸取16 ml于小燒杯中，靜置待填料沉降至燒杯底部，吸取并棄去上清。

2、在燒杯中加入4倍體積的ddH2O，混勻，靜置，沉降后去上清。重復(fù)2次以充分洗去保存填料中的乙醇。

3、在空柱中加入柱體積10%的裝柱緩沖液，靜置除去可能存在于柱壁和柱底部薄膜上的氣泡。

4、以1:1（v/v）比例在燒杯中加入裝柱緩沖液（20 mM sodium phosphate, pH 7.0, 1 M NaCl），混勻。用玻璃棒引流加入至柱中，并用裝柱緩沖液填滿剩余柱體積。靜置30 min。

5、待填料均沉降至柱底部后，將適配器以較小的傾斜角度插入至柱中填料頂部。

（1）打開(kāi)柱低端開(kāi)口，以較大流速10 ml/min泵入裝柱緩沖液，壓實(shí)填料。

（2）緩慢降低緩沖液的流速，并將裝柱緩沖液更換成結(jié)合緩沖液（20 mM sodium phosphate, pH 7.0）。

（3）設(shè)定蛋白純化程序，使用15倍柱體積緩沖液線性梯度洗脫目的蛋白。

（4）收集流出液，進(jìn)行SDS-PAGE檢測(cè)。

西安pg電子官方生物科技有限公司是可以提供一些列的蛋白類產(chǎn)品改性，熒光標(biāo)記，偶連抗體 多肽或者聚合物或其他小分子偶連蛋白產(chǎn)品，我們也可以把一些無(wú)機(jī)納米顆粒如納米金棒，磁性納米顆粒偶連蛋白。

牛血清白蛋白?羥基磷灰石納米粒子

苯胺紅標(biāo)記牛血清白蛋白(BSA)

188Re標(biāo)記丙氧鳥(niǎo)苷白蛋白納米微球

牛血清白蛋白(BSA)/槲皮素(QUE)納米顆粒

牛血清白蛋白/魔芋多糖凝膠

膠體金標(biāo)記牛血清白蛋白BSA

銪螯合物(CTTAA:Eu)標(biāo)記牛血清白蛋白抗原

牛血清白蛋白修飾紫杉醇(BSA-PTX)

牛血清白蛋白分子修飾單晶硅

牛血清白蛋白-三聚氰胺偶聯(lián)物

牛血清白蛋白修飾金納米簇

氨基酸修飾牛血清白蛋白BSA

荊豆凝集素修飾牛血清白蛋白脂質(zhì)體(UEAI-LIP)

牛血清白蛋白納米管

糖基化修飾牛血清白蛋白(AGE-BSA)

牛血清白蛋白修飾發(fā)光碳量子點(diǎn)

BSA牛血清白蛋白修飾葡萄糖氧化酶

牛血清白蛋白修飾PLGA納米粒

牛血清白蛋白修飾近紅外熒光納米金

纖維粘連蛋白修飾多孔PLGA

牛血清蛋白修飾CdTe量子點(diǎn)

Gold-BSA 牛血清白蛋白包裹納米金

IR825-BSA 近紅外染料標(biāo)記牛血清白蛋白

(BSA-OA)油酸包裹牛血清白蛋白

牛血清白蛋白包裹二氧化硅核殼納米粒子

牛血清白蛋白包裹四氧化三鐵納米粒子

牛血清白蛋白乳酸-羥乙酸共聚物微球

二氧化硅-牛血清白蛋白顆粒(SiO?/BSA)

羥基偶聯(lián)牛血清白蛋白(OH-BSA)

疊氮功能化牛血清白蛋白(N3-BSA)

氨基修飾牛血清白蛋白(NH2-BSA)

(BSA-MAL)馬來(lái)酰亞胺功能化牛血清白蛋白

(BSA-Biotin)生物素修飾牛血清白蛋白

(BSA-SH)巰基功能化牛血清白蛋白

生物素-螺旋霉素A

HA-BSA ;透明質(zhì)酸70K-牛血清白蛋白

生物素-轉(zhuǎn)鐵蛋白;Biotin-Transferrin

2-辛炔酸-牛血清白蛋白;2-辛炔酸-BSA

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