Cy3-SA,CY3標(biāo)記鏈霉親和素的化學(xué)反應(yīng)原理
CY3標(biāo)記的鏈霉親和素(Cy3-SA)是通過將CY3熒光染料的活性基團(tuán)與鏈霉親和素蛋白的可反應(yīng)側(cè)鏈進(jìn)行共價(jià)偶聯(lián)而形成的復(fù)合物。該偶聯(lián)過程的核心是CY3-NHS酯(N-羥基琥珀酰亞胺酯)與鏈霉親和素分子中賴氨酸殘基的伯胺基之間的親核酰胺化反應(yīng)。
具體來說,CY3-NHS酯作為一種活潑的酯類化合物,在堿性緩沖體系(pH 8.0-8.5)中,NHS酯的酯鍵易被鏈霉親和素蛋白上的氨基親核攻擊。此反應(yīng)產(chǎn)生一個(gè)過渡態(tài)的四面體中間體,隨后NHS基團(tuán)離去,形成穩(wěn)定的酰胺鍵,從而實(shí)現(xiàn)染料與蛋白質(zhì)的共價(jià)連接。
該化學(xué)反應(yīng)具有高度的選擇性,主要針對蛋白中的自由氨基,且反應(yīng)條件溫和,能夠保證鏈霉親和素蛋白的構(gòu)象和功能保持完整。反應(yīng)溫度一般控制在室溫,時(shí)間從數(shù)十分鐘到數(shù)小時(shí)不等,以確保充分標(biāo)記且避免蛋白質(zhì)變性。
偶聯(lián)后,Cy3染料的芳香族結(jié)構(gòu)使其具有優(yōu)異的光學(xué)性質(zhì),包括高量子效率和較強(qiáng)的光穩(wěn)定性。該標(biāo)記使鏈霉親和素蛋白在保持對生物素高親和力的同時(shí),兼具熒光檢測能力。
反應(yīng)完成后,通常通過透析、凝膠過濾或超濾技術(shù)去除未反應(yīng)的游離染料,確保標(biāo)記物的純度。該純化過程保證了Cy3-SA的性能穩(wěn)定,適合于后續(xù)的熒光成像和生物分子捕獲實(shí)驗(yàn)。
總結(jié)而言,CY3標(biāo)記的鏈霉親和素的化學(xué)反應(yīng)原理基于NHS酯-伯胺的酰胺化反應(yīng),這一經(jīng)典且高效的偶聯(lián)方式,實(shí)現(xiàn)了染料與蛋白質(zhì)的穩(wěn)定連接,兼具生物功能與熒光性能,應(yīng)用于多種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品名稱:Cy3-SA,CY3標(biāo)記鏈霉親和素
純度:95%+
性狀:固體或液體
儲(chǔ)藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規(guī)格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
廠家:pg電子官方生物
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