CY3-siNC，CY3標(biāo)記非編碼小干擾RNA的制備方法

Cy3-siNC是一種非編碼（Negative Control，負(fù)對(duì)照）小干擾RNA，其序列不靶向任何已知基因，且?guī)в袩晒馊玖螩y3，用作RNA干擾實(shí)驗(yàn)中的對(duì)照組，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的特異性和準(zhǔn)確性。

制備方法詳述：

非編碼序列設(shè)計(jì)

設(shè)計(jì)不與任何細(xì)胞內(nèi)mRNA匹配的隨機(jī)序列，保證不影響任何基因表達(dá)。序列長(zhǎng)度通常為19-21核苷酸，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。

合成與純化

利用固相化學(xué)合成方法合成siRNA雙鏈，合成流程包括核苷酸逐步加成、脫保護(hù)及切割。

純化步驟采用高效液相色譜（HPLC）或凝膠電泳去除雜質(zhì)，保證產(chǎn)品純度。

Cy3標(biāo)記修飾

在合成時(shí)，5’端或3’端引入帶有氨基修飾的核苷酸，為Cy3-NHS酯的標(biāo)記反應(yīng)提供位點(diǎn)。

Cy3-NHS酯在適宜緩沖條件（pH 8.0-8.5）下與氨基發(fā)生酰胺鍵形成，標(biāo)記反應(yīng)一般進(jìn)行1-3小時(shí)，避光以防熒光淬滅。

雙鏈退火

標(biāo)記單鏈siRNA與對(duì)應(yīng)互補(bǔ)鏈按1:1比例混合，緩慢退火形成穩(wěn)定雙鏈結(jié)構(gòu)，模擬siRNA活性形式。

純化與鑒定

反應(yīng)完成后通過(guò)透析、凝膠過(guò)濾或HPLC純化，去除未反應(yīng)的Cy3和游離單鏈。

采用紫外-可見(jiàn)光譜、熒光光譜和質(zhì)譜確認(rèn)標(biāo)記的成功與分子完整性。

儲(chǔ)存條件

純化后產(chǎn)品凍干或儲(chǔ)存在-20℃避光環(huán)境，確保標(biāo)記熒光穩(wěn)定和分子活性。

質(zhì)量控制

進(jìn)行功能驗(yàn)證，確保siNC不干擾靶基因表達(dá)，熒光強(qiáng)度適合檢測(cè)。

產(chǎn)品名稱(chēng)：CY3-siNC

純度：95%+

性狀：固體或液體

儲(chǔ)藏條件：-20°C干燥避光保存

包裝規(guī)格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

廠家：pg電子官方生物

關(guān)于我們

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