產(chǎn)品名稱：CY5標記伊維菌素的實驗步驟

一、實驗步驟

1. 材料準備

試劑：

CY5-NHS酯（如Sulfo-CY5 NHS酯，水溶性更佳）。

伊維菌素原料藥。

有機溶劑（DMF、DMSO）。

緩沖液（PBS，pH 7.4）。

設(shè)備：

高效液相色譜（HPLC）用于純化與驗證。

熒光光譜儀、質(zhì)譜儀。

2. 反應(yīng)流程

步驟1：溶解伊維菌素

將伊維菌素溶于DMF或DMSO中，濃度約為5-10 mg/mL。

步驟2：激活CY5-NHS酯

將CY5-NHS酯溶于DMF中，濃度約為1-5 mg/mL。

步驟3：偶聯(lián)反應(yīng)

將CY5溶液緩慢加入伊維菌素溶液中，室溫下攪拌反應(yīng)2-4小時。

步驟4：終止反應(yīng)

加入過量甘油或Tris緩沖液終止反應(yīng)。

3. 純化與驗證

純化方法：

HPLC：使用C18柱，流動相為乙腈/水（含0.1% TFA），梯度洗脫分離未反應(yīng)的CY5與標記產(chǎn)物。

透析法：將反應(yīng)液裝入透析袋（MWCO 1000-3000），用PBS透析24小時，去除小分子雜質(zhì)。

驗證手段：

熒光光譜：檢測標記產(chǎn)物在670 nm處的熒光發(fā)射峰。

質(zhì)譜（MS）：確認分子量增加（CY5分子量≈750 Da）。

HPLC：純度分析，確保無未反應(yīng)的CY5殘留。

4. 生物活性驗證

體外實驗：

將標記后的伊維菌素與寄生蟲（如線蟲）共培養(yǎng)，觀察其驅(qū)蟲活性是否保留。

體內(nèi)實驗：

小鼠模型中檢測熒光信號分布，并與未標記伊維菌素的藥效對比。

二、應(yīng)用場景

1. 生物成像

活體成像：利用CY5的近紅外特性，追蹤伊維菌素在動物體內(nèi)的分布與代謝。

細胞實驗：熒光顯微鏡觀察伊維菌素在細胞內(nèi)的攝取與定位。

2. 藥物遞送研究

靶向驗證：結(jié)合特定受體（如GABA受體），研究伊維菌素的靶向性。

載體開發(fā)：將標記產(chǎn)物用于脂質(zhì)體或納米顆粒的制備，優(yōu)化藥物遞送系統(tǒng)。

3. 藥代動力學(xué)研究

定量分析：通過熒光強度測定伊維菌素在血液或組織中的濃度。

代謝路徑：追蹤伊維菌素在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物與排泄途徑。

溫馨提示：僅用于科研，不能用于人體實驗！wyh

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