產(chǎn)品名稱:FITC-Biotin,異硫氰酸熒光素標(biāo)記生物素的反應(yīng)條件
一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與組成
1. 化學(xué)結(jié)構(gòu)
FITC(異硫氰酸熒光素):
分子式:C??H??NO?S,分子量約389.4 g/mol。
功能:提供綠色熒光(激發(fā)波長495 nm,發(fā)射波長519 nm),用于熒光標(biāo)記。
生物素(Biotin):
分子式:C??H??N?O?S,分子量約244.31 g/mol。
功能:與親和素/鏈霉親和素高親和力結(jié)合(Kd≈10??? M),實現(xiàn)靶向識別。
連接方式:
FITC的異硫氰酸酯基團(tuán)(-N=C=S)與生物素的氨基反應(yīng),形成穩(wěn)定的硫脲鍵(-NH-C(=S)-NH-)。
整體分子式:C??H??N?O?S?,分子量約831.02 g/mol(含連接臂)。
2. 結(jié)構(gòu)示意圖
Biotin-NH? + FITC-N=C=S → Biotin-NH-C(=S)-NH-FITC
二、合成方法
1. 反應(yīng)條件
步驟:
生物素溶解在弱堿性緩沖液(如PBS,pH 7.4)中。
加入FITC,室溫反應(yīng)2-4小時。
反應(yīng)式:Biotin-NH? + FITC-N=C=S → Biotin-NH-C(=S)-NH-FITC + H?S↑。
關(guān)鍵參數(shù):
pH值:7-9(弱堿性環(huán)境促進(jìn)氨基反應(yīng))。
溫度:室溫(25℃)反應(yīng),避免高溫導(dǎo)致熒光淬滅。
摩爾比:FITC與生物素的摩爾比通常為1:1至2:1,以平衡標(biāo)記效率與產(chǎn)物純度。
2. 純化方法
透析:使用截留分子量3.5 kDa的透析袋,去除未反應(yīng)的FITC和副產(chǎn)物。
凝膠過濾色譜:如Sephadex G-25,進(jìn)一步純化目標(biāo)產(chǎn)物。
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