產(chǎn)品名稱:FITC-D-Lys,異硫氰酸熒光素標記賴氨酸的光譜特性與穩(wěn)定性
一、化學結(jié)構與合成
化學結(jié)構
FITC(異硫氰酸熒光素):分子量389.4,核心為氧雜蒽環(huán),含異硫氰酸酯基團(-N=C=S)。
D-賴氨酸:分子式C?H??N?O?,D型氨基酸,手性中心(α-碳)保留。
連接方式:FITC的異硫氰酸酯基團與D-賴氨酸的ε-氨基(-NH?)通過親核加成反應形成穩(wěn)定的硫脲鍵(-NH-C(=S)-NH-),生成分子式C??H??N?O?S,分子量約535.57。
合成步驟
FITC活化:無需額外活化,異硫氰酸酯基團直接反應。
D-賴氨酸處理:溶解于pH 8.0-9.0的碳酸氫鈉緩沖液,游離氨基。
偶聯(lián)反應:避光條件下,F(xiàn)ITC溶液緩慢加入D-賴氨酸溶液,室溫攪拌1-2小時。
終止與純化:加入甘氨酸封閉未反應位點,通過超濾、透析或HPLC純化,純度>95%。
二、光譜特性與穩(wěn)定性
光譜特性
激發(fā)波長:490-495 nm(最大495 nm)。
發(fā)射波長:520-530 nm(最大520 nm),黃綠色熒光。
熒光強度:量子產(chǎn)率高,適合低豐度靶標檢測。
pH依賴性:熒光強度在pH>7時增強,堿性環(huán)境更穩(wěn)定。
穩(wěn)定性與儲存
短期儲存:2-8℃避光保存,有效期數(shù)周。
長期儲存:-20℃冷凍保存,避免反復凍融。
注意事項:避光操作防光漂白;緩沖液可添加BSA或甘油提高穩(wěn)定性。
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