產(chǎn)品名稱:Cy3/5/7標(biāo)記PE藻紅蛋白,Cyanine5-PE/CY5-PE的組成與化學(xué)結(jié)構(gòu)
一、結(jié)構(gòu)特性
1. 組成與化學(xué)結(jié)構(gòu)
藻紅蛋白(PE):
天然熒光蛋白,分子量約240,000 Da,由α、β亞基(各約20,000 Da)和γ亞基(約30,000 Da)組成,通過硫醚鍵連接開鏈線性四吡咯化合物。
熒光特性:吸收峰565 nm,發(fā)射峰578 nm,熒光強(qiáng)度是熒光素的30-100倍,量子產(chǎn)率高,光穩(wěn)定性好。
生物學(xué)功能:天然熒光探針,可用于免疫檢測、流式細(xì)胞術(shù)及光動力治療(因能產(chǎn)生單線態(tài)氧)。
Cy5染料:
近紅外花菁染料,激發(fā)波長650 nm,發(fā)射波長670 nm,含共軛多環(huán)芳香體系,具有高熒光強(qiáng)度和低背景干擾。
Cy5-PE復(fù)合物:
結(jié)合方式:Cy5通過共價鍵(如NHS酯與PE的氨基反應(yīng))與PE結(jié)合,形成穩(wěn)定的熒光標(biāo)記蛋白。
光譜特性:支持多色標(biāo)記(PE激發(fā)565 nm/發(fā)射578 nm,Cy5激發(fā)650 nm/發(fā)射670 nm)。
二、合成方法
1. 主要合成步驟
PE的純化:
從紅藻中提取并純化PE,確保高純度(A565/A280>5.5)。
Cy5的活化:
使用NHS酯或異硫氰酸酯活化Cy5的羧酸基團(tuán)。
偶聯(lián)反應(yīng):
在pH 8.0-9.0的緩沖液中,將活化后的Cy5與PE的氨基反應(yīng),形成共價鍵。
純化:
通過透析或色譜法去除未反應(yīng)的Cy5,得到Cy5-PE復(fù)合物。
儲存:
避光干燥條件下,-4℃可穩(wěn)定保存12個月。
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