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          FITC-HA-Biotin,熒光素-透明質(zhì)酸-生物素的制備方法
          發(fā)布時(shí)間:2025-07-18     作者:wyh   分享到:

          產(chǎn)品名稱:FITC-HA-Biotin,熒光素-透明質(zhì)酸-生物素的制備方法

          制備方法

          方法1:分步合成法

          HA的活化

          將HA(分子量10-100 kDa)溶解于MES緩沖液(pH 6.0),加入EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺)和NHS(N-羥基琥珀酰亞胺),活化HA的羧基(-COOH),生成NHS酯中間體。

          FITC標(biāo)記

          將FITC溶解于DMSO,緩慢滴加至活化后的HA溶液中,室溫避光反應(yīng)4小時(shí),通過(guò)透析(MWCO 3.5 kDa)去除未反應(yīng)的FITC,得到FITC-HA。

          生物素修飾

          將FITC-HA溶解于PBS(pH 7.4),加入生物素-NHS酯(或生物素-PEG-NHS),反應(yīng)2小時(shí),通過(guò)透析或凝膠過(guò)濾純化,最終產(chǎn)物為FITC-HA-Biotin。

          方法2:點(diǎn)擊化學(xué)法(更高效)

          炔烴修飾HA

          將HA與炔丙基胺反應(yīng),引入炔烴基團(tuán)(通過(guò)酰胺鍵連接)。

          疊氮化FITC和生物素

          合成疊氮基-FITC(如FITC-PEG-N?)和疊氮基-生物素(如Biotin-PEG-N?)。

          點(diǎn)擊偶聯(lián)

          在CuSO?/抗壞血酸鈉催化下,將炔烴-HA與疊氮基-FITC和疊氮基-生物素反應(yīng),生成FITC-HA-Biotin,通過(guò)HPLC純化,收率>85%。

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          FITC-HA-Biotin,熒光素-透明質(zhì)酸-生物素

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