Sulfo-Cyanine5 dUTP 是一種結(jié)合了Sulfo-Cyanine5(磺化Cyanine5)熒光染料和脫氧尿苷三磷酸(dUTP)的熒光標(biāo)記核苷酸。該分子專為DNA酶反應(yīng)及DNA合成過(guò)程中摻入而設(shè)計(jì),能夠在DNA分子中以替代普通的dTTP形式被DNA聚合酶有效整合。摻入Sulfo-Cyanine5 dUTP的DNA片段會(huì)發(fā)射鮮明的遠(yuǎn)紅色熒光,便于實(shí)現(xiàn)高靈敏度的檢測(cè)和成像。
化學(xué)結(jié)構(gòu)及特性
染料部分:Sulfo-Cyanine5是一種水溶性良好、極具光穩(wěn)定性的紅色熒光染料,激發(fā)波長(zhǎng)約為650 nm,發(fā)射波長(zhǎng)約為670 nm;撬峄鶊F(tuán)賦予該染料優(yōu)異的水溶性及低非特異性結(jié)合,適合在復(fù)雜生物體系中使用。
核苷酸部分:dUTP結(jié)構(gòu)允許該分子被DNA聚合酶作為替代堿基摻入DNA鏈中。
連接方式:熒光染料通過(guò)穩(wěn)定的共價(jià)鍵連接于dUTP分子,使得摻入的核苷酸既保持生物活性,又具備熒光標(biāo)記功能。
應(yīng)用原理及功能
Sulfo-Cyanine5 dUTP可在多種DNA合成反應(yīng)中被摻入,包括:
體外DNA合成與擴(kuò)增:如PCR擴(kuò)增、末端標(biāo)記、酶催化合成等
DNA酶標(biāo)記:DNA聚合酶在擴(kuò)增過(guò)程中摻入Sulfo-Cyanine5 dUTP,使產(chǎn)物帶有紅色熒光標(biāo)簽
熒光原位雜交(FISH):標(biāo)記探針的合成,方便探測(cè)細(xì)胞核內(nèi)特定DNA序列
DNA損傷和修復(fù)研究:追蹤新合成的DNA鏈及修復(fù)過(guò)程
優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)
高靈敏度熒光檢測(cè):遠(yuǎn)紅色發(fā)射減少了生物樣品自發(fā)熒光干擾,提高信噪比
水溶性好、穩(wěn)定性強(qiáng):磺酸基團(tuán)確保在水相體系中分散均勻且染料不易光漂白
兼容多種酶反應(yīng)體系:可被多種DNA聚合酶識(shí)別并有效摻入DNA鏈
簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程:直接摻入法減少了傳統(tǒng)標(biāo)記過(guò)程中的復(fù)雜步驟
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