化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)
sulfo-Cyanine5.5 dUTP是含有熒光染料sulfo-Cyanine5.5修飾的脫氧尿苷三磷酸(dUTP)衍生物。其基本結(jié)構(gòu)由以下部分組成:
脫氧尿苷三磷酸(dUTP):是DNA合成的原料之一,結(jié)構(gòu)包含脫氧核糖、尿嘧啶堿基及三磷酸基團。
sulfo-Cyanine5.5熒光染料:一種水溶性、帶負電荷的近紅外熒光染料,具有光穩(wěn)定性和高量子產(chǎn)率,發(fā)射波長約為695 nm,適合深紅至近紅外成像。
連接基團:通常通過共價鍵將sulfo-Cyanine5.5連接到dUTP分子上的核苷堿基或糖部分,使得染料能夠隨DNA鏈摻入。
功能和用途
sulfo-Cyanine5.5 dUTP作為一種標記的核苷酸,主要功能是在DNA合成過程中被DNA聚合酶摻入新合成的DNA鏈中,實現(xiàn)DNA的熒光標記和檢測。它的廣泛應(yīng)用包括:
DNA合成與擴增檢測
在PCR、核酸擴增技術(shù)(如qPCR)或體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中摻入sulfo-Cyanine5.5 dUTP,能直接在擴增產(chǎn)物中引入熒光標簽,無需后續(xù)標記步驟,簡化流程并提升效率。
熒光原位雜交(FISH)
通過使用sulfo-Cyanine5.5 dUTP標記的探針,可以高靈敏度地檢測染色體上的特定序列,實現(xiàn)細胞核或組織切片中目標DNA的定位和定量。
基因表達分析與單分子檢測
結(jié)合熒光原位擴增技術(shù),可利用該染料的近紅外發(fā)射優(yōu)勢,實現(xiàn)低背景、高信噪比的基因表達分析,適合單分子水平研究。
細胞和組織成像
其近紅外光譜特性使其適合活細胞及活體成像,穿透力強,背景干擾少,特別適合復(fù)雜生物樣本的熒光成像。
特點
近紅外激發(fā)與發(fā)射波長
sulfo-Cyanine5.5 dUTP在近紅外區(qū)發(fā)射,減少了細胞自發(fā)熒光的干擾,提高信號的特異性和靈敏度。
水溶性好,生物相容性佳
sulfo基團增加染料的親水性,避免染料聚集,提高標記的均一性和穩(wěn)定性,適合生物體系使用。
高光穩(wěn)定性和量子效率
該染料具有較高的光穩(wěn)定性和亮度,適合長時間熒光成像和高靈敏度檢測。
直接摻入DNA,簡化操作
通過DNA聚合酶直接摻入,無需后續(xù)化學(xué)反應(yīng)或標記步驟,便于快速檢測。
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