核苷酸偶聯(lián)肽定制技術(shù)

將核苷酸分子與多肽共價(jià)偶聯(lián)，可用于核酸遞送系統(tǒng)的構(gòu)建、核酸酶模擬、藥物前體構(gòu)建等領(lǐng)域。通過化學(xué)合成手段使寡核苷酸與多肽形成穩(wěn)定共軛物，是當(dāng)今多功能遞送系統(tǒng)的關(guān)鍵技術(shù)。

1. 核苷酸偶聯(lián)策略

胺-羧基縮合：利用肽鏈上的氨基與寡核苷酸5'/3'端的羧基或磷酸修飾形成酰胺鍵；

疊氮-炔基點(diǎn)擊反應(yīng)：寡核苷酸修飾疊氮基，多肽引入炔基，在Cu(I)存在下發(fā)生環(huán)加成反應(yīng)；

馬來酰亞胺-巰基反應(yīng)：寡核苷酸修飾馬來酰亞胺基團(tuán)，與多肽上的巰基共價(jià)結(jié)合；

生物素-親和素橋聯(lián)：通過生物素化的核苷酸與多肽偶聯(lián)親和素，再結(jié)合形成復(fù)合物。

2. 合成流程簡要（以Click化學(xué)為例）

合成炔基修飾多肽（如Lys(NH?)-N?）；

設(shè)計(jì)合成5'-疊氮修飾的寡核苷酸；

使用CuSO?/NaAsc/THPTA體系催化，進(jìn)行點(diǎn)擊反應(yīng)；

反應(yīng)后純化（HPLC/凝膠電泳）及質(zhì)譜驗(yàn)證。

3. 應(yīng)用方向

反義寡核苷酸遞送：多肽提供細(xì)胞穿透能力，核酸實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)調(diào)控；

核酸疫苗系統(tǒng)：核苷酸-肽復(fù)合體模擬天然Toll樣受體激活；

靶向遞送載體：核酸構(gòu)建結(jié)構(gòu)域或信號序列，多肽輔助穿膜或定位；

探針/傳感器設(shè)計(jì)：熒光核苷酸與識(shí)別肽共軛，實(shí)現(xiàn)靶向檢測。

4. 定制內(nèi)容

核苷酸序列：DNA/RNA/修飾核酸（如2'-OMe、LNA等）；

偶聯(lián)位點(diǎn)選擇：5'-NH?/3'-SH 等；

多肽序列和修飾：帶N端疊氮、巰基、炔基、熒光基團(tuán)等；

可提供電泳驗(yàn)證、MALDI-TOF、UV吸收等表征服務(wù)。

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