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          Amino-11-UTP,氨基-11-UTP一種化學(xué)修飾的核苷三磷酸
          發(fā)布時間:2025-07-04     作者:zyl   分享到:

          Amino-11-UTP(也稱為氨基-11-UTP、Aminoallyl-UTP、11-氨基烷基-UTP)是一種化學(xué)修飾的核苷三磷酸,屬于核苷酸衍生物,其分子由尿苷三磷酸(UTP)骨架,通過一段柔性的 11 碳烷基鏈與伯胺基團相連接。

          分子結(jié)構(gòu)與特性

          在 Amino-11-UTP 的結(jié)構(gòu)中,尿苷的核苷環(huán)保留了原本的堿基配對能力,不影響其在 RNA 合成過程中的堿基識別。而其獨特之處在于核苷環(huán)上通過碳鏈接上一個伯胺基團。這個氨基鏈為 11 個碳的烷基鏈(Undecyl linker),提供了足夠的柔韌性與空間,使氨基基團在摻入 RNA 后能遠離核酸主鏈,降低空間位阻,并在后續(xù)標記中更加易于反應(yīng)。氨基基團可以與多種官能團發(fā)生化學(xué)反應(yīng),如 NHS 酯、異硫氰酸酯、疊氮化物等,實現(xiàn)熒光、酶標、親和標記或其他修飾。

          Amino-11-UTP 在水溶液中溶解度良好,常以三鈉鹽的形式存在。其分子量較普通 UTP 稍大,但仍可被多種 RNA 聚合酶識別和摻入到 RNA 鏈中。

          合成與制備

          Amino-11-UTP 一般由化學(xué)合成制得。首先在尿苷分子 5 位引入具有活性的 linker,隨后進行三磷酸化反應(yīng),后與三鈉鹽形成穩(wěn)定的水溶性產(chǎn)品。現(xiàn)代合成工藝多采用磷酰氯法或磷酸吡咯啉法來完成三磷酸基團的引入,保證較高的純度和產(chǎn)率。

          Amino-11-UTP

          Amino-11-UTP 的應(yīng)用

          RNA 摻入與標記
          Amino-11-UTP 主要的應(yīng)用是作為標記型 UTP 摻入 RNA。轉(zhuǎn)錄體系中用部分或全部 Amino-11-UTP 替代常規(guī) UTP,可在 RNA 上引入伯胺基團。后續(xù)可通過 NHS 酯偶聯(lián)熒光染料、biotin、酶標記物(如 HRP)、或其他探針,實現(xiàn) RNA 的多種功能化修飾。這對于 RNA 探針制備、熒光原位雜交(FISH)、RNA pull-down、定量檢測等實驗至關(guān)重要。

          熒光探針制備
          使用 Amino-11-UTP 可高效制備熒光標記的 RNA 探針,如 Alexa Fluor、Cy3、Cy5 等熒光染料與氨基基團共價偶聯(lián),制成用于檢測特定 mRNA、lncRNA 或病毒基因組 RNA 的探針。這類探針具有高靈敏度、低背景、信噪比高的優(yōu)點。

          生物芯片與微陣列
          在 RNA 微陣列(microarray)檢測中,通過 Amino-11-UTP 摻入的氨基基團,可與固相載體(如玻璃片、硅片)表面官能團(如環(huán)氧、醛基)形成共價鍵,將 RNA 探針牢固固定在芯片上,提高芯片信號的穩(wěn)定性。

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