DSPE-PEG-DBCO 與某疊氮分子結(jié)合的合成實驗步驟
以下是 DSPE-PEG-DBCO 與疊氮分子結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)擊化學(xué)合成實驗步驟，適用于水相體系中的偶聯(lián)反應(yīng)，如構(gòu)建靶向脂質(zhì)體、納米藥物載體、或表面修飾材料。
一、反應(yīng)概述（無銅點(diǎn)擊 SPAAC 反應(yīng)）
反應(yīng)類型： 應(yīng)變促進(jìn)疊氮-炔烴環(huán)加成（SPAAC）
核心反應(yīng)：
DSPE-PEG-DBCO + R–N? → DSPE-PEG-Triazole-R
二、所需材料
1. 原料化合物
化合物 | 說明 |
DSPE-PEG2000-DBCO | 商品名：DSPE-PEG-DBCO，MW ≈ 2800 Da |
疊氮修飾分子 R–N? | 如 N?-染料、N?-適配體、N?-糖、小分子等 |
2. 溶劑與緩沖液（視應(yīng)用選擇）
去離子水、PBS（pH 7.4）、HEPES（pH 7.2–7.5）
DMSO（如疊氮分子難溶時，可少量溶于 DMSO）
三、實驗步驟
步驟 1：準(zhǔn)備反應(yīng)體系
溶解 DSPE-PEG-DBCO
將其溶于 PBS 或 HEPES 緩沖液中，濃度通常為 1–5 mg/mL
若難溶可先溶于少量 DMSO，再稀釋至所需體積
溶解 R–N?（疊氮化物）
若為小分子（如 N?-糖/N?-染料），直接溶于水或少量 DMSO
若為蛋白或寡核苷酸，應(yīng)在合適緩沖液中溶解
步驟 2：反應(yīng)混合與孵育
按摩爾比 1:1.2（DSPE-PEG-DBCO:R–N?） 混合
室溫或 37°C 反應(yīng) 2–4 小時
避光操作（如涉及熒光探針）
示例：
DSPE-PEG-DBCO (100 μL, 2 mg/mL)
+ N?-Cy5 (10 μL, 1 mM)
→ 混合總量至 200 μL，PBS緩沖液中反應(yīng) 2 小時
步驟 3：產(chǎn)物純化
根據(jù) R–N? 分子大小選擇合適方式：
情況 | 純化方法 |
小分子（Cy5,糖類） | 超濾（Amicon 10–30 kDa） |
DNA/RNA, aptamer | 透析袋（MWCO 3.5–8 kDa） |
脂質(zhì)體修飾 | 超速離心、SEC 層析 |
聚合物納米粒子表面修飾后 | 離心洗滌、透析 |
步驟 4：分析與驗證
UV-Vis/NIR：監(jiān)測 DBCO 峰消失、新熒光峰生成
FTIR/質(zhì)譜：確認(rèn)三唑環(huán)形成
DLS、Zeta、電鏡：用于脂質(zhì)體/納米粒穩(wěn)定性驗證
流式細(xì)胞術(shù)、共聚焦顯微鏡：用于靶向功能驗證（如含熒光染料）
四、注意事項
項目 | 建議 |
pH 控制 | 建議保持在 7.0–7.4，避免極端酸堿 |
DMSO 含量 | ≤10%，以免影響生物體系穩(wěn)定性 |
無需銅催化劑 | 與 CuAAC 不同，SPAAC 不需催化劑 |
防止水解 | DSPE-PEG-DBCO 避免長時間暴露于水中 |
儲存條件 | DSPE-PEG-DBCO 建議 –20°C 干燥避光儲存 |
五、典型實驗數(shù)據(jù)參考（示例）
項目 | 值 |
DSPE-PEG-DBCO 用量 | 2 mg（約 0.7 μmol） |
N?-Cy5 用量 | 1.2 eq（約 0.84 μmol） |
反應(yīng)時間 | 2 小時，室溫 |
成品純度 | 95%以上（超濾除去游離染料） |
應(yīng)用示例 | 構(gòu)建靶向脂質(zhì)體，細(xì)胞成像等 |
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