通過(guò)長(zhǎng)期在小鼠腹膜內(nèi)注射玉米油或四氯化碳建立肝纖維化動(dòng)物模型，分別給予TAF 4.5 mg/（kg·天）或TDF 50 mg/（kg·天）處理。其次，體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了TAF/TDF對(duì)肝星狀細(xì)胞（LX-2細(xì)胞）分化、激活、增殖的影響。在TAF/TDF處理后的小鼠肝臟及LX-2細(xì)胞中檢測(cè)NS5ATP9表達(dá)水平以及TGFβ1/Smad3、NF-κB/NLRP3炎性小體信號(hào)通路的活性。最后，體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)中，分別基因敲除或基因沉默NS5ATP9后檢測(cè)纖維化相關(guān)基因表達(dá)水平。

1.TAF/TDF在小鼠體內(nèi)****四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，TAF/TDF****四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化及肝臟炎性反應(yīng)，同時(shí)體外研究發(fā)現(xiàn)TAF/TDF可以調(diào)節(jié)肝星狀細(xì)胞分化、激活、增殖：TAF/TDF**下調(diào)細(xì)胞外基質(zhì)沉積相關(guān)基因的表達(dá)水平，并改善Ishak評(píng)分系統(tǒng)評(píng)估的肝纖維化嚴(yán)重程度（圖1）。

圖1. 基于Ishak評(píng)分系統(tǒng)評(píng)估的纖維化評(píng)分和分級(jí)（n=7）

注：*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001

2.TAF/TDF在體內(nèi)外均**TGFβ1/ Smad3、NF-κB/ NLRP3炎性小體信號(hào)通路的活性

TGFβ1/Smad3信號(hào)通路是目前已知的關(guān)鍵的肝纖維化驅(qū)動(dòng)因素[3]；NLRP3炎性小體能夠激活NF-κB信號(hào)通路，導(dǎo)致肝星狀細(xì)胞激活、膠原沉積、凋亡蛋白酶1和白細(xì)胞介素1β釋放[4-6]。

四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化中，TGFβ1/Smad3和NF-κB信號(hào)通路被激活，而TAF/TDF**使其活性**降低；TAF/TDF降低四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化中升高的NLRP3、凋亡蛋白酶1和白細(xì)胞介素1β水平（圖2），且TAF/TDF****LPS激活的NLRP3炎性小體和肝星狀細(xì)胞；TAF/TDF促使TGFβ1激活的肝星狀細(xì)胞轉(zhuǎn)化為靜息狀態(tài)（合成蛋白及mRNA水平降低），并促進(jìn)肝星狀細(xì)胞凋亡、**其增生。

綜上，TAF和TDF通過(guò)TGFβ1/Smad3和NF-κB/NLRP3炎癥小體兩條平行信號(hào)通路影響肝纖維化的進(jìn)程；同時(shí)，因?yàn)?/span>NF-κB信號(hào)通路在TGFβ1/Smad3激活后會(huì)自發(fā)激活，所以推測(cè)兩條信號(hào)通路之間也存在相互調(diào)節(jié)。

圖2. Western Blot及PT-qPCR分析顯示的小鼠肝臟內(nèi)NLRP3表達(dá)水平   注：*P<0.05

3.TAF/TDF通過(guò)NS5ATP9在體內(nèi)外減輕肝纖維化

丙型肝炎病毒非結(jié)構(gòu)蛋白5A反式激活蛋白9（NS5ATP9）被發(fā)現(xiàn)能夠**肝星狀細(xì)胞的增生并促進(jìn)其凋亡[7]。NS5ATP9缺陷**增加細(xì)胞外基質(zhì)沉積并加重肝臟損害；TAF/TDF在體內(nèi)外均上調(diào)NS5ATP9的表達(dá)（圖3）。NS5ATP9過(guò)表達(dá)****TGFβ1/ Smad3和NF-κB信號(hào)通路，而沉默NS5ATP9使這些信號(hào)通路的活性**增強(qiáng)；因此NS5ATP9通過(guò)TGFβ1/ Smad3和NF-κB/ NLRP3炎性小體信號(hào)通路**肝纖維化。體內(nèi)外基因敲除或基因沉默NS5ATP9均降低TAF/TDF**效果。

TAF/TDF通過(guò)上調(diào)NS5ATP9表達(dá)，調(diào)控TGFβ1/Smad3和NF-κB/NLRP3炎性小體信號(hào)通路，從而阻止肝纖維化的進(jìn)展并促進(jìn)其逆轉(zhuǎn)。TAF/TDF可調(diào)控肝星狀細(xì)胞分化、激活、增殖。該研究結(jié)果提供了TAF/TDF可能具有抗肝纖維化作用的證據(jù)。

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zzj 2021.3.24