脂肪組織巨噬細(xì)胞來(lái)源的外泌體miRNA可在體內(nèi)和體外調(diào)節(jié)胰島素敏感性

鑒定巨噬細(xì)胞能否分泌miRNA：

（1）小室實(shí)驗(yàn)

用于證明外泌體從供體細(xì)胞釋放后，能到達(dá)受體細(xì)胞，且外泌體以及它體內(nèi)的貨物均能被受體細(xì)胞吸收。將Cy3標(biāo)記miR-233 mimic的轉(zhuǎn)染進(jìn)骨髓源性巨噬細(xì)胞（BMDMS），然后培養(yǎng)于Transwell的上室，下室是不表達(dá)Cy3標(biāo)簽的3T3-L1脂肪細(xì)胞。共培養(yǎng)12h后，在下室中觀察得紅色熒光的Cy3-miR-233，是共培養(yǎng)前的6倍，表明這兩種細(xì)胞間存在一種介質(zhì)起了運(yùn)輸miRNA的作用（圖1）。在對(duì)照實(shí)驗(yàn)中，我們用Cy3單獨(dú)(不與miR-223結(jié)合)處理BMDMs，在與這些BMDM共培養(yǎng)12小時(shí)后，發(fā)現(xiàn)這種熒光染料在BMDMs中的出現(xiàn)可忽略不計(jì)，在3T3-L1脂肪細(xì)胞中沒有染料出現(xiàn)（圖2）。因此，認(rèn)為巨噬細(xì)胞可以分泌細(xì)胞外miRNA，它們被攝取到脂肪細(xì)胞中。

鑒定ATM能否分泌外泌體:

為了確認(rèn)脂肪組織巨噬細(xì)胞（ATM）是否可以外泌體，從肥胖野生型小鼠的內(nèi)臟脂肪組織（VAT）中分離出脂肪組織巨噬細(xì)胞(ATM)（CD11b+F4/80+），并培養(yǎng)72小時(shí)，電子顯微鏡（圖4）和納米觀察分析（圖5）顯示，通過(guò)超速離心分離的顆粒含有豐富的ATM分泌的胞外小泡，其直徑為30-100 nm。這些EV的密度梯度超速離心分析證實(shí)，它們主要由Exos組成，通過(guò)外體特異性蛋白標(biāo)記物TSG101、syntenin1、CD63等的表達(dá)得到證明，主要以圖6表示。

圖3. 超速離心分離外泌體

圖4.電鏡觀察外泌體**杯狀囊膜結(jié)構(gòu)

圖5.NTA分析外泌體的粒徑和濃度表征

圖6.Westernblot鑒定TSG101等外泌體蛋白標(biāo)志物

產(chǎn)品供應(yīng)：

胞外囊泡/細(xì)胞微粒/微囊泡/外泌體/EVs/exosomes    

含RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm)    

綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞-外泌體    

直徑40-100nm的盤狀囊泡    

exosome/外泌體    

細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體    

多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中    

細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體    

細(xì)胞類型均可分泌外泌體    

特異性分泌的膜泡    

外泌體含膽固醇和鞘磷脂    

肥大細(xì)胞分泌外泌體    

mRNA，exosomes具有生物活性    

41860種蛋白質(zhì)、2838種microRNA、3408種mRNA    

Rabs蛋白/鳥苷酸三磷酸酶(GTPases）    

調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細(xì)胞的融合    

外泌體中含RAB4, RAB5和 RAB11，RAB7 和 RAB9    

膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11    

四跨膜蛋白家族（CD63, CD81 和CD9)    

熱休克蛋白家族（(HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2 和HSP90    

細(xì)胞特異性的蛋白包括A33（結(jié)腸上皮細(xì)胞來(lái)源）    

MHC-Ⅱ(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)    

CD86(抗原提呈細(xì)胞來(lái)源)    

乳凝集素（不成熟的樹突狀細(xì)胞）    

外泌體中的蛋白含代謝類的酶    

GAPDH    

烯醇化酶 1    

醛縮酶 1    

PKM2    

PGK1    

PDIA3    

GSTP1    

DPP4    

AHCY    

TPL1    

抗氧化蛋白    

P4HB    

LDH    

親環(huán)素 A    

FASN,    

MDH1    

CNP    

核糖體蛋白（RPS3）    

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)因子    

黑色素瘤分化相關(guān)因子    

ARF1    

CDC42    

人類紅細(xì)胞膜整合蛋白    

SLC9A3R1    

粘附因子    

MFGE8    

整合素    

細(xì)胞骨架蛋白    

泛素    

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體    

應(yīng)用：機(jī)體免疫應(yīng)答    

抗原提呈    

細(xì)胞遷移    

細(xì)胞分化    

**侵襲    

細(xì)胞膜外泌體    

外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體    

外泌體研究整體方案設(shè)計(jì)；    

外泌體提取/粒徑測(cè)量/電鏡檢測(cè)；    

外泌體蛋白組/轉(zhuǎn)錄組    

客戶提供樣本提取外泌體    

外泌體抽離/抽提    

全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)    

外泌體分離產(chǎn)品和工具    

外泌體分離/提取    

外泌體整體技術(shù)服務(wù)    

外泌體lncRNA芯片    

外泌體small RNA    

外泌體提取    

外泌體染色：PKH67/PKH26    

外泌體WB鑒定    

CD81外泌體慢病毒包裝    

CD63外泌體慢病毒包裝    

CD9外泌體慢病毒包裝    

外泌體粒徑檢測(cè)    

外泌體電鏡檢測(cè)/透射電鏡    

外泌體蛋白組分析    

外泌體標(biāo)記/鑒定/分離/提取/    

外泌體(Exosomes)鑒定    

外泌體marker抗體    

外泌體CD9抗體    

外泌體CD81抗體    

外泌體CD63抗體    

外泌體分離單克隆抗體    

Anti CD9,CD63,CD81    

細(xì)胞外囊泡標(biāo)記外泌體單克隆抗體    

細(xì)胞外囊泡(外泌體和微囊泡)    

標(biāo)記外泌體試劑    

外泌體流式細(xì)胞分子    

外泌體細(xì)胞成像    

外泌體細(xì)胞結(jié)構(gòu)成像    

外泌體標(biāo)記化學(xué)    

外泌體熒光選擇標(biāo)記    

外泌體免疫分析    

外泌體神經(jīng)科學(xué)    

外泌體細(xì)胞示蹤    

外泌體細(xì)胞追蹤    

外泌體細(xì)胞形態(tài)學(xué)    

外泌體單細(xì)胞分析    

外泌體微生物分析    

外泌體熒光微孔技術(shù)    

外泌體RNA-微生物    

FITC外泌體捕獲親和磁珠    

CD63抗體免疫捕獲外泌體    

**靶向外泌體    

靶向**衍生外泌體    

外泌體仿生靶向**    

外泌體仿生納米**/顆粒    

外泌體可誘導(dǎo) T 細(xì)胞的凋亡    

調(diào)控功能性 T 細(xì)胞 (Treg)     

誘導(dǎo) M2 巨噬細(xì)胞的極化    

**自然殺傷細(xì)胞 (NK) 的抗**毒性    

**樹突狀細(xì)胞的 (DC) 分化為成熟 DC    

外泌體基因改造    

上述產(chǎn)品僅用于科研，不可用于人體試驗(yàn)！

wyf 01.11