質(zhì)粒提取磁珠試劑盒
英文名稱(chēng)：Plasmid extraction magnetic bead kit
本試劑盒采用具有獨(dú)特分離作用的磁珠和緩沖液系統(tǒng)，從樣品中分離純化**質(zhì)粒DNA，特殊包被的磁珠，在一定條件下對(duì)目的DNA具有很強(qiáng)的親和力，而當(dāng)條件改變時(shí)，磁珠釋放吸附的DNA，能夠達(dá)到快速分離純化DNA的目的。整個(gè)過(guò)程不涉及有毒試劑，安全、便捷、提取的DNA純度高。使用本試劑盒純化的基因組DNA(OD260-OD320)/(OD280-OD320)均在1.7～2.0之間，可以應(yīng)用到各類(lèi)下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
適用范圍
適用于各種質(zhì)粒DNA的提取，適用于自動(dòng)化核酸提取平臺(tái)。
試劑盒包裝及組成
試劑盒組成 | 數(shù)量 |
裂解液S1 | 50ml |
裂解液S2 | 20ml |
結(jié)合液 | 50ml |
磁珠 | 1.5ml*2 |
洗脫液 | 20ml |
使用說(shuō)明書(shū) | 1份 |
圖譜：
注意事項(xiàng)
1.菌種過(guò)夜培養(yǎng)OD值需達(dá)到0.1以上。
2.磁珠用前一定要充分混勻。
3.取過(guò)夜培養(yǎng)的菌液離心后，盡量吸干凈上清，否則可能影響質(zhì)粒純度。
4.整個(gè)裂解過(guò)程操作盡量溫和，并在要求時(shí)間內(nèi)完成。
5.如果菌液濃度較高，則建議磁珠量可適當(dāng)增加，以獲取高濃度質(zhì)粒。
操作方法
1.裂解
取1-2ml（低拷貝質(zhì)�？扇�2-5ml）過(guò)夜培養(yǎng)的菌液至1.5mlEP管中，12,000rpm離心1min，盡量吸凈上清，加入100μl Buffer A（高拷貝可用50ul），振蕩重懸菌體，保證無(wú)菌塊存在。加入100μl Buffer B溫和顛倒混勻6～9次，至溶液清澈可見(jiàn)，時(shí)間3min。加入75μl Buffer C立即溫和顛倒混勻6～9次，溶液出現(xiàn)絮狀沉淀，靜置冰上2min以充分中和。12,000rpm離心10min。
2.結(jié)合
取上清于新的1.5mlEP管中,加入振蕩混勻的磁珠5μl，異丙醇250μl（自備），顛倒混勻5min。將EP管置于磁力架上進(jìn)行磁分離，吸棄廢液（吸凈管蓋及管底殘液）。
3.洗滌
加入500μl洗滌液，輕柔混勻1-2min，然后磁分離，吸凈管蓋及管底的殘液；
4.洗脫
室溫晾干5min，加入100μl洗脫液，緩慢抽吸混勻，65℃溫浴10min。每隔2～3min輕搖EP管幾下混勻。然后磁分離，小心吸取上清液至新的EP管中，進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)。
常見(jiàn)問(wèn)題及參考意見(jiàn)
常見(jiàn)問(wèn)題 | 可能的原因 | 建議 |
得率低 | 大腸桿菌老化 | 涂布平板培養(yǎng)后，重新挑選新菌落進(jìn)行液體培養(yǎng) |
未加抗生素或抗生素失效導(dǎo)致質(zhì)粒丟失 | 確保培養(yǎng)基含有正確、**的抗生素 | |
菌體濃度太低 | 增加培養(yǎng)前菌體接入量或增加菌體收集（取2～5 ml菌體離心），或檢查抗生素濃度是否過(guò)高 | |
培養(yǎng)菌體沒(méi)在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期早期 | 保存時(shí)間較長(zhǎng)的菌種,需過(guò)夜培養(yǎng)2～3次后使用 | |
質(zhì)粒拷貝數(shù)低 | 由于使用低拷貝數(shù)載體引起的質(zhì)粒DNA提取量低，可更換具有相同功能的高拷貝數(shù)載體 | |
裂解不充分 | 使用過(guò)多菌體培養(yǎng)液，會(huì)導(dǎo)致菌體裂解不充分，可減少菌體用量或增加試劑的用量 | |
溶液使用不當(dāng) | BufferB和BufferC在溫度較低時(shí)可能出現(xiàn)渾濁，應(yīng)置于37℃保溫片刻直至溶解為清亮的溶液，才能使用 | |
裂解時(shí)間過(guò)長(zhǎng) | 加入BufferB后裂解時(shí)間不超過(guò)5分鐘 | |
結(jié)合不充分 | 結(jié)合過(guò)程中要使磁珠一直處于懸浮狀態(tài)，結(jié)合時(shí)間嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū) | |
洗脫液減少 | 根據(jù)需要可適當(dāng)減少洗脫液用量（≥30μl）增加質(zhì)粒產(chǎn)量 |
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